[發明專利]一種抗HPV16 L1蛋白的單克隆抗體、其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510438579.4
• 申請日: 2015-07-23
• 公開（公告）號: CN105367652B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 李啟明;張靖;梁宇;靳玉琴;唐芳;張學峰;侯俊偉
• 申請（專利權）人: 北京生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 北京東巖躍揚知識產權代理事務所(普通合伙) 11559
• 代理人: 葉平

本發明提供了一種人乳頭瘤病毒高危致癌亞型——16型L1蛋白和/或VLP的抗體或抗原結合部分，包含有SEQ ID NO.1?3所示的重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區域和SEQ ID NO.4?6所示的輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區域。本發明提供的特異性結合HPV16L1蛋白和/或VLP的抗體或抗原結合部分與其他大部分HPV亞型，如HPV6、11、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等型別無交叉反應，特異性高，具有中和HPV16假病毒并阻斷其感染的特性，且親和性高。利用兩株抗體建立的雙抗夾心ELISA檢測試劑盒，可用于HPV16L1蛋白檢測存在或水平試劑盒的研發，以及針對患者的治療和對易感人群進行被動免疫，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及免疫學領域，更具體地，本發明涉及一種特異性結合人乳頭瘤病毒HPV16L1蛋白的抗體、制備方法及其在體外檢測試劑盒中的應用。

背景技術

人乳頭瘤病毒(HPV)是一組無包膜的小DNA病毒，感染人皮膚及粘膜上皮組織，可誘發產生疣狀增生乃至引發良惡性腫瘤。根據感染后誘發病變的良惡性不同分為高危型HPV和低危型HPV。高危型HPV感染與宮頸癌及癌前病變的發生密切相關，此外還與粘膜相關的癌及癌前病變的發生相關。HPV16屬于高危型HPV，流行病學調查及臨床統計數據均顯示HPV16與宮頸癌及其他癌癥呈現高度相關，HPV16和HPV18型誘發的宮頸癌占所有HPV陽性宮頸癌的70％以上，高危型HPV感染相關的惡性病變中以婦女宮頸癌的發病率最高，全球范圍內的發病率僅次于乳腺癌，高居婦科惡性腫瘤的第二位。預防HPV感染和宮頸癌最有效的方法就是接種HPV疫苗，目前已上市的HPV疫苗，包括Merck公司的四價疫苗“Gardasil”和九價疫苗“Gardasil9”，以及GSK公司的雙價疫苗“Cervarix”，這三種疫苗都包括HPV16的疫苗成分。HPV疫苗可刺激機體產生保護性中和抗體，在有效的治療和預防HPV感染和宮頸癌中具有重要意義。

研究發現，具有中和能力的單抗基本都識別構象表位，并且大多數識別型特異性構象表位的單克隆抗體都具有中和能力。不同中和單抗通過封閉病毒與細胞第二受體的結合位點，可阻止病毒感染入胞的發生，對這些單抗結合表位的研究有利于解釋病毒感染入胞的關鍵位點。目前多數認為，在動物的HPV感染中，血清IgG(主要是中和IgG)能以足夠高的濃度穿過宮頸上皮，特別是在鱗狀、柱狀上皮結合處，從而與病毒顆粒結合并阻止感染發生。對疫苗誘發產生的中和抗體活性的測定是檢測預防性疫苗免疫保護性的重要標準。中和活性抗體在HPV疫苗的免疫原性檢測和含量測定中具有重要的應用前景。目前僅有一種HPV16中和單抗——H16.V5抗體在國外有所報道，該抗體成功的應用于HPV16疫苗生產過程中的有效成分的質量控制。

因此，研發更多類型，針對各種不同表位的HPV16單抗，對于更好的研究HPV病毒以及研發HPV疫苗具有重要作用，并將抗體應用于HPV感染的診斷、預防和治療也是十分必要。

發明內容

為了解決以上技術問題，本發明的一個方面是提供一種特異性結合人乳頭瘤病毒HPV16L1蛋白和/或VLP的抗體，包含有SEQ ID NO.1-3所示的重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區域和SEQ ID NO.4-6所示的輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區域。

本發明的另一個方面是提供一種特異性結合人乳頭瘤病毒HPV16L1蛋白和/或VLP的抗體，包含有如SEQ ID NO.7所示的重鏈可變區氨基酸序列和如SEQ ID NO.8所示的輕鏈可變區氨基酸序列。

本發明所述抗體均為單克隆抗體。

作為優選，在本發明的一個實施方式中，所述抗體是由保藏編號為CGMCCNO.10955的細胞產生的單克隆抗體。所述細胞是由免疫后的宿主脾細胞和骨髓瘤細胞融合得到的雜交瘤細胞，其被保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC NO.10955，保藏日期為2015年7月6日。