[發(fā)明專利]一種磁性納米復(fù)合顆粒的制備方法及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201510435269.7 | 申請(qǐng)日： | 2015-07-23 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN105107473A | 公開（公告）日： | 2015-12-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 孫俊;馬海樂;徐斌;蔣蒙蒙 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 江蘇大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | B01J20/26 | 分類號(hào)： | B01J20/26;B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C12N9/36 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 212013 江*** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 磁性 納米 復(fù)合 顆粒 制備 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種磁性納米復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行：
將可溶性Fe2+和Fe3+鹽溶解在體積比為1:1～10:1純水和無水乙醇的混合溶液中，向其中加入表面活性劑，并通氮?dú)?0min，整個(gè)反應(yīng)均在超聲波體系中（F=28KHz）進(jìn)行；之后將溫度升高到40～70℃后緩慢滴加堿液到反應(yīng)體系中，最終使pH值達(dá)到10～11，反應(yīng)30min后繼續(xù)向體系中加入一定量的表面殼體材料，之后將溫度升高到70～90℃反應(yīng)1～6h，終止反應(yīng)，之后在外加磁場(chǎng)的作用下分離磁性顆粒，并且用去離子水清洗數(shù)次至中性，并進(jìn)行干燥處理，即可得磁性納米復(fù)合顆粒粉末，簡(jiǎn)寫為MNPs。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種磁性納米復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于其中所述的可溶性的Fe2+化合物是四水氯化亞鐵或七水硫酸亞鐵；可溶性的Fe3+化合物是六水氯化鐵；其中Fe2+與Fe3+的摩爾比為1:2～2:1，總鐵離子濃度為0.03～0.5M。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種磁性納米復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于其中所述的堿液選用氨水或氫氧化鈉中的任何一種或其混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種磁性納米復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于其中所述的水和無水乙醇的體積比為1:1～10:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種磁性納米復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于其中所述的表面活性劑選用聚乙二醇6000、十二烷基苯磺酸鈉和十六烷基三甲基溴化銨中的任何一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種磁性納米復(fù)合顆粒的制備方法，其特征在于其中所述的表面殼體材料為殼聚糖、羧甲基殼聚糖、硫酸軟骨素鈉或者檸檬酸中的任何一種。
7.權(quán)利要求1所述的一種磁性納米復(fù)合顆粒應(yīng)用于蛋清中溶菌酶的快速分離純化的方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行：
（1）新鮮蛋清原液的制備
蛋黃、蛋清分離，之后將新鮮蛋清與磷酸鹽緩沖溶液(20mM,pH7.0～10.0)按體積比1:1～1:3的比例進(jìn)行稀釋，然后在冰水浴中連續(xù)攪拌反應(yīng)6h，攪拌產(chǎn)生的白色絮狀沉淀在4℃以10,000rpm冷凍離心30min，除去不溶性沉淀；所得上清液作為溶菌酶的分離純化的蛋清原液；
（2）采用磁性納米復(fù)合顆粒從蛋清原液中分離純化溶菌酶
將MNPs加入到蛋清原液中，在0～37℃條件下，攪拌（100～400rpm）反應(yīng)30～180min，使蛋清中的溶菌酶特定地吸附在MNPs表面，在外加磁場(chǎng)的作用下將吸附有溶菌酶的MNPs從蛋清溶液中分離出來，用去離子水清洗三次去除雜質(zhì)，再用洗脫液進(jìn)行洗脫，收集溶菌酶的洗脫液，洗脫液保存在4℃冰箱中；
溶菌酶洗脫液采用SDS-PAGE電泳進(jìn)行純度分析；
分離膠濃度：12%；濃縮膠濃度：6%；
最后將溶菌酶洗脫液進(jìn)行冷凍干燥，并測(cè)定其活性保留。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種磁性納米復(fù)合顆粒應(yīng)用于蛋清中溶菌酶的快速分離純化的方法，其特征在于其中所述的磷酸鹽緩沖溶液（pH7.0～10.0）對(duì)新鮮蛋清進(jìn)行稀釋；
其中所述的磁性納米復(fù)合顆粒與蛋清溶液的反應(yīng)時(shí)間為30～180min；
其中所述的洗脫液選用磷酸鹽緩沖溶液(pH=9，20mM，0.5M氯化鈉)，磷酸鹽緩沖溶液(pH=9，20mM，1M氯化鈉),醋酸（0.1M）和鹽酸（0.1M）中的任何一種；
其中所述的吸附反應(yīng)溫度為0～37℃；
其中所述的機(jī)械攪拌的轉(zhuǎn)速為100～400rpm范圍內(nèi)。
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