[發(fā)明專利]一種超濾處理黃霉素發(fā)酵液的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510433960.1
• 申請(qǐng)日: 2015-07-22
• 公開（公告）號(hào): CN105037451B
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳斌;李蓉;俱名揚(yáng);郭燕彬;楊凱迪;馬曉迅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H13/12
• 分類號(hào): C07H13/12;C07H1/06
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司61200
• 代理人: 王霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種超濾處理黃霉素發(fā)酵液的方法。

背景技術(shù)

黃霉素，又名默諾霉素(moenomycin)，是一種磷酸糖脂類抗生素，為斑伯氏鏈霉菌的發(fā)酵產(chǎn)物，是一些結(jié)構(gòu)類似物的通用名稱。黃霉素對(duì)革蘭氏陽性菌作用較強(qiáng)，其藥理作用在于干擾肽聚糖的生物合成，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞破裂而引起細(xì)菌自溶。長(zhǎng)期以來，黃霉素主要作為抗生素類畜禽生長(zhǎng)促進(jìn)劑在世界各國使用。中國專利CN1194984A公開了黃霉素的新用途，黃霉素及其鉍鹽組合物可以控制幽門螺桿菌的感染，治療胃潰瘍等各種胃病。為了減少藥物的副作用，人用藥物其藥用組分一般為單一的化合物，因此黃霉素A組分的分離純化研究?jī)r(jià)值凸顯。

英國專利GB1068639與中國專利ZL 200510051382.1通過對(duì)溶劑萃取、透析、沉淀、硅酸鎂柱層析脫色、凝膠過濾柱層析、陰離子交換色譜、反相色譜等分離純化方法的不同組合，去除了其它雜質(zhì)，得到了黃霉素各組分的混合物。

有關(guān)單一黃霉素A組分的分離純化文獻(xiàn)如下所述：

美國專利US 3660569在對(duì)料液前處理的基礎(chǔ)上，通過硅膠正相色譜得到黃霉素A組分。

孫承航等人(磷酸糖脂類抗生素moenomycin A的分離和鑒定,中國抗生素雜志，2003,28(6):325-327,360)先以美國專利US 3660569公開的正相色譜預(yù)分離黃霉素，再通過分析級(jí)反相色譜柱，得到了黃霉素A組分純品。

中國專利ZL 201210029457.6公開了一種制備黃霉素A組分的方法。通過C18固相萃取→C18分析柱分離→C18固相萃取進(jìn)一步精制，為了保證純度，所用試劑均為色譜純及超純水，最后得到淡黃色的Mon A。

美國專利US 5986089所公開的黃霉素A組分的制備工藝其核心工藝為大孔吸附或超濾與溶劑萃取組合→陰離子交換色譜→反相色譜。

綜上所述，由于黃霉素各組分之間結(jié)構(gòu)的類似性，為了得到單一的黃霉素A組分，上述專利均以不同模式的色譜分離為核心。為了達(dá)到色譜分離的目的，同時(shí)也為了保護(hù)昂貴的色譜填料，在色譜分離前都有多步預(yù)處理工藝，工藝冗長(zhǎng)繁瑣，成本極高。

德國Hoechst公司申報(bào)了一系列關(guān)于黃霉素分離純化的專利，如英國專利GB 1068639、美國專利US 3660569、US 3674866等都提及黃霉素具有不可透析的特性，也就是說黃霉素作為一種分子量68000-70000的大分子化合物，不能透過常規(guī)的膜孔。并以此特性為基礎(chǔ)分離、純化黃霉素。如英國專利GB 1068639提出透析法分離黃霉素有特別的優(yōu)勢(shì)，并在實(shí)施實(shí)例中將溶劑萃取后的黃霉素連續(xù)透析3天。作為透析原理的現(xiàn)代工業(yè)應(yīng)用，美國專利US 5986089也在實(shí)施例中詳解了超濾法分離純化黃霉素的過程，但以實(shí)施例中的數(shù)據(jù)來分析，超濾法的實(shí)際效果遜于大孔吸附法。

后來的研究表明黃霉素各組分的分子量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于早期的認(rèn)識(shí)，真實(shí)的分子量小于1600。黃霉素之所以不能透析以及早期對(duì)其分子量的錯(cuò)誤認(rèn)識(shí)在于黃霉素獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)。黃霉素為兩性化合物，其一端為疏水性極強(qiáng)的C25脂肪鏈，另一端含有5個(gè)親水性極強(qiáng)的單糖，以及可電離的3個(gè)酸性位點(diǎn)，因此其物理化學(xué)性質(zhì)與離子型表面活性劑類似。在水溶液中黃霉素分子相互聚集，以膠束的形式存在，因而表現(xiàn)出大分子的特征，比如難以透析。也正是基于此特性，英國專利GB 1068639、美國專利US 5986089通過膜分離的方式分離黃霉素，即小分子雜質(zhì)透過膜孔，而將黃霉素以大分子膠束的形式滯留在膜的另一側(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種超濾處理黃霉素發(fā)酵液的方法，該方法操作流程簡(jiǎn)單，節(jié)能環(huán)保，

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明公開了一種超濾處理黃霉素發(fā)酵液的方法，包括以下步驟：

1)將黃霉素發(fā)酵液用去離子水連續(xù)超濾1h，棄去透析液；

2)將步驟1)超濾截留的黃霉素發(fā)酵液用含有膠束調(diào)節(jié)劑的水溶液繼續(xù)超濾1h，收集富集黃霉素的透析液。

步驟2)所述的膠束調(diào)節(jié)劑為甲醇、乙醇、異丙醇、乙二醇、甲酰胺或尿素。

超濾所用超濾膜的材質(zhì)為聚醚砜、聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺。

超濾所用超濾膜的截留分子量為3000～50000。

在步驟1)前還包括對(duì)黃霉素發(fā)酵液進(jìn)行預(yù)處理，具體操作為：將黃霉素發(fā)酵液于4℃冷藏過夜，然后在8000r/min的條件下離心10min。

在步驟2)后還包括對(duì)富集黃霉素的透析液采用色譜法進(jìn)行精制的步驟。