[發(fā)明專(zhuān)利]一種可視化多色檢測(cè)抗原?抗體反應(yīng)試劑盒及使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510430364.8
• 申請(qǐng)日: 2015-07-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105067803B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李根喜;李超;吳丹;衛(wèi)璐明;黎天琪
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/53
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/53
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所32207
• 代理人: 胡錫瑜

1.一種可視化多色檢測(cè)抗原-抗體反應(yīng)試劑盒，其特征是由標(biāo)記了甲基紅修飾石墨烯的CEA抗體，標(biāo)記了酚酞修飾石墨烯的NSE抗體，標(biāo)記了百里酚酞修飾石墨烯的Cyfra21-1抗體和包被有CEA、NSE和Cyfra21-1單抗混合物的96孔板，pH值為12.0堿水，PBST緩沖液組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種可視化多色檢測(cè)抗原-抗體反應(yīng)試劑盒的使用方法，其特征是由以下步驟構(gòu)成：

(1)制備多抗體標(biāo)記的96孔板：將多抗原的單抗以一定濃度比例混合后孵育96孔板，洗滌后再用胎牛血清或山羊血清或馬血清進(jìn)行封閉，封閉時(shí)間為30～120分鐘，封閉溫度為25～40℃，處理的目的是為了使標(biāo)記的抗體能夠與待測(cè)樣品充分而穩(wěn)定的反應(yīng)；

(2)抗原抗體反應(yīng)：向步驟(1)中加入待測(cè)樣品，洗滌后加入修飾有變色小分子的石墨烯標(biāo)記的抗體，充分反應(yīng)后去除未反應(yīng)的多余石墨烯標(biāo)記的抗體，所述變色小分子為甲基紅MR或酚酞PP或百里酚酞TP或溴甲酚紫BP或溴甲酚綠BG；優(yōu)選為MR、PP和TP，MR、PP和TP與石墨烯分子的質(zhì)量比分別為1：13.4～53.8，1：15.9～95.4，1：4.3～43，所述石墨烯標(biāo)記的抗體為單抗或多抗，三種變色分子功能化石墨烯的抗體混合物中的濃度配比為1.5:1:0.5，所述抗原-抗體反應(yīng)的孵育時(shí)間為30～120分鐘，孵育溫度為25～40℃；

(3)可視化檢測(cè)：向步驟(2)反應(yīng)體系中加入堿性水，充分反應(yīng)后根據(jù)反應(yīng)體系顏色的變化判斷樣品中是否發(fā)生反應(yīng)，所述堿性水pH值為10.0～13.0，用20mM氫氧化鈉調(diào)配，所述反應(yīng)體系的顏色變化在3～15分鐘內(nèi)出現(xiàn)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種可視化多色檢測(cè)抗原-抗體反應(yīng)試劑盒，其特征是可同時(shí)可視化檢測(cè)多種抗原抗體反應(yīng)。