[發明專利]人類MTHFR和MTRR基因多態性檢測引物和試劑盒

有效

• 申請號: 201510428708.1
• 申請日: 2015-07-20
• 公開（公告）號: CN105002275A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: 周鵬飛;蔡從利;張喆;葉婷;張浩
• 申請（專利權）人: 武漢友芝友醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京市百倫律師事務所 11433
• 代理人: 周紅力

1.用于同時檢測人類MTHFR和MTRR基因多態性的特異性引物序列，其特征在于，所述特異性引物序列的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1-9所示。

2.一種用于同時檢測人類MTHFR和MTRR基因多態性的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有權利要求1所述的特異性引物序列。

3.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒中還含有3組特異性探針，所述3組特異性探針的核苷酸序列分別為SEQ?ID?NO:10與SEQ?ID?NO:11，SEQ?ID?NO:12與SEQ?ID?NO:13，SEQ?ID?NO:14與SEQ?ID?NO:15，且所述特異性探針的5’端修飾有FAM或VIC，3’端修飾有NFQ-MGB。

4.根據權利要求3所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒中還包括內標系統，所述內標系統包含內標引物和內標探針，所述內標引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:16和SEQ?ID?NO:17所示，所述內標探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:18所示。

5.根據權利要求4所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述內標探針5’端修飾有ROX，3’端修飾有BHQ2。

6.根據權利要求2-5中任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有陽性對照液和空白對照液，所述陽性對照液中含有6種質粒DNA，所述6種質粒DNA中分別含有4種不同的MTHFR等位基因和2種不同的MTRR等位基因，所述空白對照為Tris-HCl緩沖液。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括HotStart?Taq酶和UNG酶。

8.利用權利要求1所述的特異性引物或權利要求2-7中任意一項所述的試劑盒同時檢測MTHFR和MTRR基因多態性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)獲得待測樣品基因組DNA；

(2)利用所述特異性引物對、熒光定量PCR探針、PCR反應緩沖液、Taq酶、UNG酶、內標系統、進行熒光定量PCR反應，其中，每個樣品的MTHFR基因多態性和MTRR基因多態性檢測分3管進行PCR反應。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR反應的體系為：

10.根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR反應的程序為：37℃處理10分鐘，95℃預變性5分鐘，預變性后按照以下程序進行40個循環：95℃?15秒，60℃?1分鐘。