[發明專利]一種大腸桿菌中融合熒光蛋白質的制備方法

有效

• 申請號: 201510426302.X
• 申請日: 2015-07-20
• 公開（公告）號: CN105018552B
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 陳華新;武靜;姜鵬;趙瑾
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N15/70;C12N15/62
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種大腸桿菌中融合熒光蛋白質的制備方法,其特征在于：將甲胎蛋白(AFP)單鏈抗體基因和別藻藍蛋白α亞基基因通過linker序列拼接成嵌合基因，并將該嵌合基因、藻膽蛋白裂合酶基因和藻膽色素生物合成酶基因在大腸桿菌中共表達，獲得共價結合藻紅膽素的融合熒光蛋白質或共價結合藻藍膽素的融合熒光蛋白；

所述linker序列是：

GGATCCGCCGAAGCGGCCGCAAAAGAAGCTGCGGCCAAGGAAGCAGCTGCGAAAGAAGCCGCAGCTAAGGCGGAATTC。

2.按權利要求1所述的大腸桿菌中融合熒光蛋白質的制備方法，其特征在于：

1)利用融合PCR，將甲胎蛋白(AFP)單鏈抗體基因，linker序列和別藻藍蛋白α亞基基因連接形成嵌合基因，將該嵌合基因插入到大腸桿菌表達載體pCDFDuet-1的一個表達框中；將裂合酶基因cpcS插入到該表達載體的另一個表達框中；

2)將藻紅膽素生物合成酶基因Ho1和pebS，分別插入到另一個表達載體pRSFDuet-1的兩個表達框中；

3)將兩個構建好的表達載體同時轉化大腸桿菌，得到重組大腸桿菌；

4)將重組大腸桿菌進行發酵培養，IPTG誘導融合蛋白表達，通過復性和金屬螯合親和層析純化，得到共價結合藻紅膽素的融合熒光蛋白質。

3.按權利要求1所述的大腸桿菌中融合熒光蛋白質的制備方法，其特征在于：

1)利用融合PCR，將甲胎蛋白(AFP)單鏈抗體基因，linker序列和別藻藍蛋白α亞基基因連接形成嵌合基因，將該嵌合基因插入到大腸桿菌表達載體pCDFDuet-1的一個表達框中；將裂合酶基因cpcS插入到該表達載體的另一個表達框中；

2)將藻藍膽素生物合成酶基因Ho1和pcyA分別插入到另一個表達載體pRSFDuet-1的兩個表達框中；

3)將兩個構建好的表達載體同時轉化大腸桿菌，篩選出同時表達上述多個基因的菌株并能夠生產融合熒光蛋白質的菌株，即得表達菌株；

4)將表達菌株進行發酵培養，IPTG誘導融合蛋白表達，利用復性和金屬螯合親和層析純化，從而得到共價結合藻藍膽素的融合熒光蛋白質。