[發(fā)明專利]一種薄殼山核桃細(xì)胞胚胎組織培養(yǎng)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510420757.0
• 申請(qǐng)日: 2015-07-16
• 公開（公告）號(hào): CN104957040A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 湯榕;湯槿;侯超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 句容市容北茶文化有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 許丹丹

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及薄殼山核桃的組織培養(yǎng)方法，具體的說是薄殼山核桃的體細(xì)胞胚胎組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

薄殼山核桃，又名美國山核桃，系胡桃科、山核桃屬中的一個(gè)種。原產(chǎn)美國和墨西哥，是世界上重要的油料干果樹種之一，其殼薄易剝、仁肉肥厚、味香可口，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。樹干通直、樹形優(yōu)美、根深葉茂，是四旁綠化及園林觀賞的優(yōu)良樹種。同時(shí)木材堅(jiān)韌致密、心材暗紅、邊材黃白、富彈性、不易變形和開裂，是建筑、高級(jí)家具等優(yōu)良用材樹種。因此，薄殼山核桃是一個(gè)用途廣、受益期長、經(jīng)濟(jì)效益高、社會(huì)效益和生態(tài)效益明顯的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)樹種。

我國自20世紀(jì)初即開始進(jìn)行薄殼山核桃的引種栽培，但是由于其結(jié)果遲、適合各地的優(yōu)良品種缺乏等因素，目前薄殼山核桃在我國尚呈零星分布，真正形成產(chǎn)量的、穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)的果用園尚不多見。且雖然薄殼山核桃種子春、秋均可播種。無論是春播還是秋播，種子易被鼠、鳥啃食。有時(shí)天氣干旱，種子失水，出苗率低。春播一般在3月下旬或四月上旬進(jìn)行。但是不管是春播或者是秋播，一年生的實(shí)生苗很難可以達(dá)到可嫁接的程度，生長緩慢。為了使得薄殼山核桃盡快踏上良種化、基地化建設(shè)的進(jìn)程，在良種催芽培養(yǎng)的同時(shí)，著手進(jìn)行砧木嫁接技術(shù)攻關(guān)，但是由于嫁接成活率不高，導(dǎo)致嫁接苗供不應(yīng)求，因此，只好栽培實(shí)生苗，然而實(shí)生苗存在投產(chǎn)遲、堅(jiān)果小，適應(yīng)性差等缺陷，市場上不受歡迎，因此，制約生產(chǎn)發(fā)展的關(guān)鍵因素有兩個(gè)，一個(gè)是缺乏充足的優(yōu)良品種苗木，另一個(gè)是缺乏科學(xué)系統(tǒng)的栽培技術(shù)。

本領(lǐng)域技術(shù)人員也從事種植大量薄殼山核桃育苗工作，重點(diǎn)進(jìn)行了薄殼山核桃扦插和嫁接等無性繁殖實(shí)驗(yàn)，但繁殖系數(shù)較低，苗木質(zhì)量參差不齊，現(xiàn)有技術(shù)中薄殼山核桃的無性繁殖技術(shù)仍停留在嘗試性試驗(yàn)階段，還沒有形成一種可以大量推廣和重復(fù)驗(yàn)證的成熟方法。因此，提供一個(gè)系統(tǒng)的薄殼山核桃育苗方法是本領(lǐng)域急待解決的技術(shù)問題。為滿足生產(chǎn)方面的需求，我們對(duì)常規(guī)播種的方法進(jìn)行了改良，并對(duì)嫁接方法進(jìn)行創(chuàng)新，以達(dá)到縮短育苗周期、增加育苗數(shù)量的目的。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：建立薄殼山核桃胚發(fā)生技術(shù)體系，實(shí)現(xiàn)薄殼山核桃優(yōu)選單株規(guī)模化高效生產(chǎn)。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種薄殼山核桃細(xì)胞胚胎的發(fā)生方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)選材：選取4年生薄殼山核桃優(yōu)選單株的當(dāng)年生萌條，將其剪成5～6cm的帶芽小段；

(2)對(duì)帶芽小段外植體進(jìn)行消毒處理；

(3)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)：在無菌條件下，將步驟(2)中的外植體用剪刀去除莖段頭尾氧化變黑部分，直接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)11～20d，分化長成無菌芽苗；所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：WPM基本培養(yǎng)基，附加0.05～0.08mg.L^-16-BA、0.05～0.06mg.L^-1NAA、25～40g.L^-1蔗糖、18～21g.L^-1蜂膠乳油、11～13g.L^-1檸檬酸、6.5～7.0g.L^-1卡拉膠，調(diào)pH值為5.2～5.4；

(4)體胚誘導(dǎo)：將步驟(3)中長成的無菌苗嫩葉接種到體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～30d；MS基本培養(yǎng)基，附加0.16～0.20mg.L^-16-BA、0.2～0.3mg.L^-1NAA、0.08～0.12mg.L^-12,4-D、0.05～0.06mg.L^-1玉米素，25～40g.L^-1蔗糖、9.5～11.0g.L-1酵母膏、6.5～7.0g.L-1卡拉膠，調(diào)pH值為5.7～5.8；

(5)體胚增殖培養(yǎng)：將步驟(4)中誘導(dǎo)產(chǎn)生的體胚，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，20～25d后，體胚迅速增殖呈黃色透明顆粒狀；體胚增殖培養(yǎng)基配方為：MS基本培養(yǎng)基，附加1.8～2.0mg.L^-16-BA、0.01～0.03mg.L^-1NAA、25～40g.L^-1蔗糖、6.5～7.0g.L^-1卡拉膠、0.05～0.08mg.L蕓苔素內(nèi)酯、0.03～0.06mg.L長春堿，調(diào)pH值為5.7～5.8；

(6)成熟培養(yǎng)：將步驟(5)中增殖獲得的體胚，接種于含有成熟培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)32～51d；體胚成熟培養(yǎng)基配方為：MS基本培養(yǎng)基，附加40～60g.L^-1蔗糖、6.5～7.0g.L^-1卡拉膠，調(diào)pH值為5.7～5.8；