[發(fā)明專利]一種檢測(cè)原代神經(jīng)干細(xì)胞遷移極化的方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510418616.5
• 申請(qǐng)日: 2015-07-16
• 公開（公告）號(hào): CN105067810B
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張敏;賴思強(qiáng);鄭加麟;許東升;仇麗莎;宋璦宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市第十人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/0797
• 分類號(hào): C12N5/0797
• 代理公司: 上海卓陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)31262
• 代理人: 金重慶

1.一種檢測(cè)原代神經(jīng)干細(xì)胞遷移極化的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a.在模具上用二甲基硅氧烷制備下表面有平行顯微通道的PDMS印章；

b.條帶包被

取消毒的玻片放入培養(yǎng)皿中，加入多聚賴氨酸進(jìn)行包被，將制備好的PDMS印章扣在多聚賴氨酸包被的玻片上，將需要研究的導(dǎo)向因子用FITC-BSA稀釋到作用濃度，然后加入到印章的微通道一端，于通道另一端抽吸使溶液充滿整個(gè)通道，待溶液干后，移除印章，在玻片上形成含有導(dǎo)向因子的平行條帶；

c.在包被好熒光條帶的玻片上進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)；

d.使用免疫熒光技術(shù)進(jìn)行染色，觀察條帶間隙中神經(jīng)干細(xì)胞貼壁后偽足的方向，計(jì)算神經(jīng)干細(xì)胞前端與后端的偽足面積比值，判斷神經(jīng)干細(xì)胞是否極化

所述PDMS印章下表面的通道寬為60μm、高為100μm，每個(gè)平行的通道之間間隔為90μm；

所述步驟b中多聚賴氨酸濃度為0.1mg/ml；

所述判斷神經(jīng)干細(xì)胞是否極化的方法為：當(dāng)神經(jīng)干細(xì)胞前端與后端的偽足面積比值為0.8-1.2時(shí)為未極化；當(dāng)神經(jīng)干細(xì)胞前端與后端的偽足面積比值＞1.2時(shí)發(fā)生極化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的神經(jīng)干細(xì)胞為C57小鼠神經(jīng)干細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的導(dǎo)向因子為對(duì)神經(jīng)纖維有導(dǎo)向作用的因子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的導(dǎo)向因子為SDF-1、BDNF或乙酰膽堿。

5.權(quán)利要求1-4任一所述的方法在檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞遷移極化中的應(yīng)用。