[發(fā)明專利]高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510415723.2
• 申請日: 2015-07-15
• 公開（公告）號: CN104946715A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發(fā)明（設計）人: 周亞軍;賀琴;王淑杰;周丹;周瑞祎;董周永
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/24
• 代理公司: 長春市四環(huán)專利事務所(普通合伙) 22103
• 代理人: 郭耀輝

技術領域：本發(fā)明涉及河蚌蛋白質的高壓脈沖電場輔助酶解提取技術，特別是涉及利用響應曲面優(yōu)化河蚌蛋白質提取條件的方法。

背景技術：河蚌，是貝殼類水生動物的一種，屬瓣腮綱、珍珠科，是中國特有資源。河蚌早在醫(yī)學記載就可用于清熱消炎，具有明目、除濕、止消渴的功效，且可滋陰養(yǎng)肝，并具有降血糖、降血脂、提高免疫力、抗衰老等保健作用?，F(xiàn)代研究表明，河蚌肉高蛋白、低脂肪，富含人體必需多種氨基酸、不飽和脂肪酸和礦物元素。因此，河蚌肉可作為食材和藥材為人體利用，具有良好保健功效，具有重要的研究價值和廣闊的應用前景。

近年來，國內(nèi)外關于肉類蛋白的研究較多，但大多集中在牛肉、雞肉、豬肉、魚肉等蛋白的開發(fā)研究，關于河蚌蛋白的研究鮮有報道。國內(nèi)河蚌養(yǎng)殖業(yè)逐漸擴大，季節(jié)性較強，且易于腐敗變質，運輸貯藏困難，嚴重影響蚌肉消費，有相當一部分被直接丟棄，造成資源浪費。蚌肉本身腥味較重，且肉質較粗韌，烹飪后口感較硬，味道欠佳，使得蚌肉直接食用和開發(fā)利用受到一定的限制。因此，以蚌肉為原料，開發(fā)營養(yǎng)價值高的河蚌蛋白粉，不僅可以充分利用國內(nèi)河蚌資源，且可滿足人們?nèi)找嬖鲩L的消費需求，研究開發(fā)潛力較大。

目前，肉類蛋白提取方法主要有鹽法、酸堿法、酶解法等。鹽提法易于操作，由于浸提液pH值接近中性，對蛋白質破壞較小，但提取效率較低，耗時長；酸堿法是利用其pH值偏離蛋白質等電點來提取的，提取效率較高，但酸堿消耗量較大，且反應環(huán)境過酸或過堿會使蛋白質可解離基團發(fā)生改變，使蛋白質構象發(fā)生不可逆轉變；酶提法反應條件較溫和，對蛋白質破壞較小，提取效率也較高。

發(fā)明內(nèi)容：基于上述現(xiàn)有技術存在的缺陷，本發(fā)明旨在提供一種以河蚌肉為原料，利用高壓脈沖電場與蛋白酶水解相結合方法提取河蚌蛋白質。該方法工藝簡單、提取率高、條件溫和、節(jié)約資源、耗時少，可實現(xiàn)河蚌肉蛋白質的高效快速提取。

其工藝流程及其控制條件如下：

A.原料及處理：新鮮的河蚌用水清洗其表面泥污，用刀將其剖開，去除蚌殼、蚌淚及內(nèi)臟組織，取蚌肉用清水清洗干凈，瀝除其表面水分，-18℃以下冷凍備用。

B.打漿：將冷凍的蚌肉從冰柜中取出，室溫下解凍，用打漿機打漿。

C.均質：將打漿后的蚌肉漿液置于膠體磨中均質，得到均一的蚌肉漿液。

D.高壓脈沖電場預處理：底物濃度以蚌肉中總蛋白含量計算，加入一定比例的蒸餾水，調節(jié)底物濃度為4％，將料液混合均勻，以10mL/min流速經(jīng)蠕動泵泵送高壓脈沖電場處理室，電場強度15-25kV/cm，脈沖數(shù)6-10個。

E.酶解提取：調節(jié)經(jīng)高壓脈沖電場預處理后的漿液pH至5.5，加入酶活4000U/g蛋白質的木瓜蛋白酶，攪拌均勻后于50℃恒溫水浴振蕩器中酶解反應1.5-2.5h，酶解過程中保持反應體系pH值恒定在5.5左右，反應結束后迅速于沸水浴中加熱10-15min以使酶失活，滅酶后將反應物置于冷水中冷卻至室溫。

F.分離：將經(jīng)滅酶和冷卻后的蚌肉酶解液置于低速離心機中離心(4000r/min，10min)，取上清液，即為蚌肉蛋白提取液。

G.除腥：在蚌肉蛋白提取液中加入1％(質量體積比)活性干酵母，混合均勻后，于35℃恒溫水浴振蕩器中反應60min，將經(jīng)除腥處理后的反應物進行離心分離(10000r/min,10min)，上清液即為除腥后的蚌肉蛋白提取液。

H.濃縮：將得到的除腥后的蚌肉蛋白提取液置于旋轉蒸發(fā)儀中，在50℃條件下減壓濃縮至可溶性固形物含量為15％-25％，即為蚌肉蛋白濃縮液。

I.干燥：將蚌肉蛋白濃縮液經(jīng)噴霧干燥后即得河蚌蛋白粉。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點和效果：

1.本發(fā)明以松花江野生河蚌肉為原料，對合理利用野生河蚌資源，變廢為寶，提高產(chǎn)品附加值、擴大淡水資源開發(fā)及節(jié)能環(huán)保具有重要的現(xiàn)實意義和深遠的社會意義；

2.本發(fā)明首次采用高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質，使河蚌肉中蛋白質更易溶出提取，真正達到高效提取。

3.本發(fā)明得到的河蚌蛋白質，可作為一種新資源食品添加劑應用于食品、飲料、蛋白粉沖劑和保健食品等各領域。

附圖說明：

下面結合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細說明。

圖1是電場強度變化對蛋白提取率的影響規(guī)律圖；

圖2是脈沖數(shù)變化對蛋白提取率的影響規(guī)律圖；

圖3是酶解時間變化對蛋白提取率的影響規(guī)律圖。

具體實施方式