[發明專利]高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝

在審

• 申請號: 201510415723.2
• 申請日: 2015-07-15
• 公開（公告）號: CN104946715A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發明（設計）人: 周亞軍;賀琴;王淑杰;周丹;周瑞祎;董周永
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/24
• 代理公司: 長春市四環專利事務所(普通合伙) 22103
• 代理人: 郭耀輝

1.一種高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝，其特征在于，以河蚌肉為原料，利用高壓脈沖電場輔助木瓜蛋白酶酶解河蚌肉蛋白并借助響應面優化提取工藝，其工藝流程和操作步驟如下：

高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝流程：原料及預處理→打漿→均質→高壓脈沖電場預處理→酶解提取→分離→除腥→濃縮→干燥→河蚌蛋白粉；

高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質操作步驟與要點如下：

(1)原料及預處理：新鮮的河蚌用水清洗其表面泥污，用刀將其剖開，去除蚌殼、蚌淚及內臟組織，取蚌肉用清水清洗干凈，瀝除其表面水分，-18℃以下冷凍備用；

(2)打漿：將冷凍的蚌肉從冰柜中取出，室溫下解凍，用打漿機打漿；

(3)均質：將打漿后的蚌肉漿液置于膠體磨中均質，得到均一的蚌肉漿液；

(4)高壓脈沖電場預處理：底物濃度以蚌肉中總蛋白含量計算，加入一定比例蒸餾水，調節底物濃度為4％，將料液混合均勻，以10mL/min流速經蠕動泵泵送高壓脈沖電場處理室，電場強度15-25kV/cm，脈沖數6-10個；

(5)酶解提取：調節經高壓脈沖電場預處理后的漿液pH至5.5，加入酶活為4000U/g蛋白質的木瓜蛋白酶，攪拌均勻后于50℃恒溫水浴振蕩器中酶解反應1.5-2.5h，酶解過程中保持反應體系pH值恒定在5.5左右，反應結束后迅速于沸水浴中加熱10-15min以使酶失活，滅酶后將反應物置于冷水中冷卻至室溫；

(6)分離：將經滅酶和冷卻后的蚌肉酶解液置于低速離心機中離心(4000r/min，10min)，取上清液，即為蚌肉蛋白提取液；

(7)除腥：在蚌肉蛋白提取液中加入1％(質量體積比)活性干酵母，混合均勻后，于35℃恒溫水浴振蕩器中反應60min，將經除腥處理后的反應物進行離心分離(10000r/min,10min)，上清液即為除腥后的蚌肉蛋白提取液；

(8)濃縮：將得到的經除腥后的蚌肉蛋白提取液置于旋轉蒸發儀中，在50℃條件下減壓濃縮至可溶性固形物含量為15％-25％，即為蚌肉蛋白濃縮液；

(9)干燥：將蚌肉蛋白濃縮液經噴霧干燥后即得河蚌蛋白粉。

2.如權利要求書1所述的高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝，其特征在于，所述反應物中底物(蛋白質)濃度為4％，酶添加量為4000U/g，于50℃、pH5.5條件下酶解1.5-2.5h。

3.如權利要求書1所述的高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝，其特征在于，所述的酶制劑為木瓜蛋白酶，酶活力為1×10⁵U/g，酶加入量為4000U/g蚌肉蛋白質；蛋白酶可作用于蚌肉組織，酶解大分子蛋白，使其降解為可溶性小分子蛋白，且反應條件溫和、效率高、時間短、安全性高。

4.如權利要求書1所述的高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝，其特征在于，所述的干燥過程中進料濃度為15-25％，進風溫度為170-180℃，進風量為80％，進料速度為8-12mL/min。

5.如權利要求書1所述的高壓脈沖電場輔助酶解提取河蚌蛋白質工藝，其特征在于，所述的河蚌肉勻漿液經高壓脈沖電場輔助酶解設置3個變量(電場強度、脈沖數和酶解時間)，根據Box-Behnken設計原理利用design?expert軟件進行數據處理及工藝優化。