[發明專利]一種無損傷提取脈紅螺基因組DNA的方法在審
| 申請號： | 201510414754.6 | 申請日： | 2015-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN104975001A | 公開（公告）日： | 2015-10-14 |
| 發明（設計）人： | 于紅;楊智鵬;李琪;于瑞海;李浩浩 | 申請（專利權）人： | 中國海洋大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201 | 代理人： | 王鐸 |
| 地址： | 266100 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 損傷 提取 紅螺 基因組 dna 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種無損傷提取脈紅螺基因組DNA的方法，其特征在于包括如下步驟：
a.?首先用浸有75%酒精的棉球擦拭脈紅螺的殼口和腹足用于消毒；
b.?將脈紅螺放于鹽度為50ppt的海水中5-8分鐘；
c.?將脈紅螺從50ppt的海水中取出，放入鹽度為29-31ppt的海水中15-20分鐘，待脈紅螺腹足伸出時將其從海水中取出，用物理刺激的方法使脈紅螺產生粘液；
d.?收集脈紅螺產生的粘液；
e.?在收集到的脈紅螺粘液加入抽提緩沖液400?μL，蛋白酶K10?μL，混勻之后，37℃消化10-12?h，采用常規的苯酚氯仿法即可提取到脈紅螺基因組DNA。
2.根據權利要求1所述的無損傷提取脈紅螺基因組DNA的方法，其特征在于所述的物理刺激的方法為：掰住脈紅螺的厴，用已消毒的小木棒、塑料或金屬棒輕輕碰觸脈紅螺的腹足，以刺激脈紅螺分泌粘液。
3.根據權利要求1所述的無損傷提取脈紅螺基因組DNA的方法，其特征在于所述收集脈紅螺粘液的方法為：用1.5?mL離心管沿殼口收集300-500μL粘液。
4.根據權利要求1所述的無損傷提取脈紅螺基因組DNA的方法，其特征在于所述抽提緩沖液的配方為：6?mol/L?尿素，10?mmol/L?Tris-HCl，125?mmol/L?NaCl，1%?SDS，10?mmol/L?Na2EDTA·2H2O，pH為?7.5。
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