[發明專利]一種乳酸鏈球菌的發酵培養基及其應用

有效

• 申請號: 201510413085.0
• 申請日: 2015-07-15
• 公開（公告）號: CN104962498B
• 公開（公告）日: 2016-11-23
• 發明（設計）人: 郭海巖;劉剛;王茂超;王興業;張淑蘭;郭莎莎;王雅靜;王洪軍
• 申請（專利權）人: 山東仙普愛瑞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/00;C12R1/46
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 呂翠蓮

技術領域

本發明涉及一種發酵培養基，適用于乳酸鏈球菌發酵生產使用，具體地說，涉及一種乳酸鏈球菌的發酵培養基及其應用，屬于微生物發酵技術領域。

背景技術

????近年來，隨著抗生素在畜牧業越來越廣泛的應用，其弊端逐漸顯現出來，耐藥性細菌的產生、動物腸道菌群的失調、殘留藥物對人體的危害等方面使抗生素治療受到限制。尋找天然無害且高效的抗菌活性物質已成為預防、治療畜禽疾病的趨勢。乳酸鏈球菌抗菌肽具有平衡胃腸道菌群，殺滅胃腸道病原菌，促進消化吸收等作用，對于雞等較易發生的消化道疾病，如腹瀉、傳染性胃腸炎、雞腸炎、沙門氏菌病等有極好的功效。

盡管乳酸鏈球菌抗菌肽有著顯著的優勢，然而由于其自身不能合成多種氨基酸、維生素及相關生長因子，因此導致營養要求和培養條件較為復雜。常用的乳酸鏈球菌培養基為MRS培養基，原料昂貴，尤其氮源成分價格比重較大，在生產中應用成本太高。生長過程中，菌體會產生乳酸等有機酸類代謝產物，使培養基的pH值不斷下降，從而抑制乳酸鏈球菌的生長，導致菌體活性下降甚至死亡。因此，采用傳統的發酵培養基，菌種密度較低，質量無法保證，且生產成本較高。

現有技術的乳酸鏈球菌培養基具有以下缺陷：乳酸鏈球菌的發酵時間長，制得的菌液含菌量低，提取的抗菌肽純度低，抗菌效果不夠理想，培養基成本高。

發明內容

本發明要解決的技術問題是針對以上不足，提供一種乳酸鏈球菌的發酵培養基，實現以下發明目的：

1、提高制備的乳酸鏈球菌菌液的含菌量；使含菌量為3.8-6.0×10⁹?cfu/ml；

2、提高培養的乳酸鏈球菌中提取的抗菌肽純度；使純度為63-72%；

3、提高培養的乳酸鏈球菌中提取的抗菌肽的抗菌效果；

4、縮短發酵培養乳酸鏈球菌的發酵時間；

5、降低發酵培養基的成本。

為實現上述發明目的，采用以下技術方案：

一種乳酸鏈球菌的發酵培養基，所述的發酵培養基包括下列組分：葡萄糖、玉米漿、磷酸氫二鉀、醋酸鈉、明膠、抗壞血酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳、蒸餾水。

以下是對上述技術方案的進一步改進：

所述發酵培養基組分的總量份為：葡萄糖25-35份、玉米漿10-20份、磷酸氫二鉀2-3份、醋酸鈉3-5份、明膠1.5-2.5份、抗壞血酸鈉0.4-0.6份、硫酸鎂0.2-0.4份、硫酸錳0.05-0.1份、蒸餾水1000份。

所述發酵培養基包括以下重量份的組分：?葡萄糖30份、玉米漿15份、磷酸氫二鉀2份、醋酸鈉4份、明膠2份、抗壞血酸鈉0.5份、硫酸鎂0.3份、硫酸錳0.08份、蒸餾水1000份。

所述發酵培養基的制備方法包括調pH值步驟：調整溶液pH值至6.8～7.0。

所述發酵培養基的制備方法還包括滅菌步驟：采用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌，滅菌溫度為121℃，滅菌時間為30min。

一種乳酸鏈球菌的發酵培養基的應用，包括制備種子液、接種、發酵步驟。

所述的制備種子液步驟：乳酸鏈球菌菌種接種量為10g/L，制成的種子液的乳酸鏈球菌含量為1.0×10⁷-5.0×10⁷cfu/ml。

所述的接種步驟中種子液：培養基的體積比為4:100。

所述的發酵步驟：發酵溫度為37-39℃，發酵罐的攪拌轉速為120r/min，發酵罐內壓力為0.05MPa。

采用本發明發酵培養基制備乳酸鏈球菌菌液，含菌量為3.8-6.0×10⁹?cfu/ml,?從得到的菌液中提取的乳酸鏈球菌抗菌肽純度為63-72%。

采用本發明技術方案，與現有技術相比，具有以下有益效果：

1、采用本發明發酵培養基制備乳酸鏈球菌菌液，含菌量為3.8-6.0×10⁹?cfu/ml；

2、采用本發明發酵培養基生產提取的乳酸鏈球菌抗菌肽純度為63-72%；

3、采用本發明發酵培養基生產提取的乳酸鏈球菌抗菌肽，對大腸桿菌的抑菌圈直徑為8.11-9.36mm，效價為7723-8627?IU/mL；抗菌肽對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為8.56-9.05mm，效價為7824-8778?IU/mL；

4、采用本發明發酵培養基進行發酵培養乳酸鏈球菌，發酵時間為30-34小時；

5、本發明發酵培養基成本為1920-2321元/噸。

具體實施方式