[發(fā)明專利]力學(xué)敏感的miR-138-5p作為藥物靶點(diǎn)在骨骼肌肉系統(tǒng)疾病中應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510411148.9
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN105169411A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 騫愛榮;陳志浩;亞瑟·阿爾法特;印崇;胡麗芳;趙帆;李迪杰;張琰;李潤芝;蘇佩紅;馬小莉;仇伍霞
• 申請（專利權(quán)）人: 西北工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/7088;A61P19/10;A61P19/08
• 代理公司: 西北工業(yè)大學(xué)專利中心 61204
• 代理人: 王鮮凱

1.一種力學(xué)敏感的miR-138-5p作為藥物靶點(diǎn)在骨骼肌肉系統(tǒng)疾病中應(yīng)用，其特征在于包括以下步驟：

步驟一、利用后肢去負(fù)荷小鼠動(dòng)物模型，尾吊28天后，將主要承重骨股骨和脛骨剝離，提取總RNA，在已有研究中查詢和骨形成有關(guān)的miRNAs，設(shè)計(jì)引物，利用qPCR技術(shù)檢測尾懸吊小鼠模型中發(fā)生明顯改變的miRNAs；

步驟二、利用qPCR和Westernblot技術(shù)檢測去負(fù)荷條件下小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3-E1和承重骨中MACF1基因水平和蛋白水平表達(dá)的影響；

步驟三、利用TargetScan數(shù)據(jù)庫分析miR-138與MACF1的靶向關(guān)系；

步驟四、設(shè)計(jì)miR-138-5p的反義核苷酸，序列為5'-CGGCCUGAUUCACAACACCAGCU-3'；體外轉(zhuǎn)染反義核苷酸到小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞中，利用礦化實(shí)驗(yàn)、ALP染色實(shí)驗(yàn)、以及qPCR技術(shù)檢測miR-138-5p的反義核苷酸對成骨細(xì)胞的分化的影響；

步驟五、利用qPCR技術(shù)檢測體外轉(zhuǎn)染miR-138-5p反義核苷酸對MACF1的影響；

步驟六、利用三維回轉(zhuǎn)模擬體外去負(fù)荷條件，培養(yǎng)已經(jīng)轉(zhuǎn)染miR-138-5p反義核苷酸的小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3-E1，之后利用qPCR技術(shù)檢測去負(fù)荷條件下，反義核苷酸antagomir-138-5p對成骨細(xì)胞分化的影響；

步驟七、采用小鼠后肢力學(xué)去負(fù)荷模型，在尾懸吊前5天，利用能夠攜帶小核酸特異性到達(dá)骨形成部位的靶向遞送系統(tǒng)6-liposome，通過尾靜脈注射反義核苷酸antagomir-138-5p(10mg/kg)，每兩天注射一次，連續(xù)3次，然后尾懸吊28天；脫頸處死小鼠后，剝離取出相關(guān)的骨骼肌測量趾長伸肌、腓腸肌、股四頭肌、比目魚肌、脛前肌相對重量變化，檢測antagomir-138-5p對骨骼肌的影響；

步驟八、如步驟七，脫頸處死小鼠后，剝離取出股骨，去除骨表面的軟組織，多聚甲醛固定后，采用MicroCT掃描，用MicroviewV2.1.2分析測試骨相關(guān)參數(shù)，并進(jìn)行三維重建；剝離取出股骨脛骨，采用ReattimePCR檢測antagomir-138-5p對承重骨骨形成的影響。