[發(fā)明專利]一種用于生物樣本的核酸提取方法及試劑有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510410272.3 | 申請日： | 2015-07-13 |
| 公開（公告）號： | CN105176969B | 公開（公告）日： | 2018-11-23 |
| 發(fā)明（設計）人： | 范倻;王岱桑;金成芳;朱勤鋒;孫剛;胡林;尤其敏 | 申請（專利權）人： | 杭州優(yōu)思達生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223 | 代理人： | 王明霞 |
| 地址： | 310053 浙江省杭州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 生物 樣本 核酸 提取 方法 試劑 | ||
1.一種用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，該方法用于提取基因組核酸，步驟包括：將生物樣本中先加入氫氧化鈉溶液，然后加入裂解液進行裂解，得到裂解反應液；所述的裂解液中含有胍鹽、乙二胺四乙酸二鈉、表面活性劑、核酸助沉劑和緩沖劑；再在裂解反應液中加入乙醇溶液，最后采用無儀器核酸提取裝置進行吸附、清洗和洗脫；其中，樣本裂解的pH值為11～13。
2.根據權利要求1所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，氫氧化鈉溶液的濃度為1～5wt％；氫氧化鈉溶液的體積與生物樣本溶液的體積比為6：1～3。
3.根據權利要求2所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，氫氧化鈉溶液的濃度為3～4wt％；氫氧化鈉溶液的體積與生物樣本溶液的體積比為6：2～3。
4.根據權利要求2所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，氫氧化鈉溶液的濃度為4wt％；氫氧化鈉溶液的體積與生物樣本溶液的體積比為6：2～3。
5.根據權利要求1所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述胍鹽選自硫氰酸胍或鹽酸胍，緩沖劑選自三羥甲基氨基甲烷，核酸助沉劑選自糖原，表面活性劑選自聚乙二醇辛基苯基醚。
6.根據權利要求5所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述裂解液中含有硫氰酸胍或鹽酸胍4～8mol/L，乙二胺四乙酸二鈉10～30mmol/L、糖原0.015～0.15mmol/L、三羥甲基氨基甲烷20～80mmol/L和聚乙二醇辛基苯基醚0.6～1.4v/v％。
7.根據權利要求6所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述裂解液中含有硫氰酸胍5～7mol/L，乙二胺四乙酸二鈉15～25mmol/L、糖原0.03～0.12mmol/L、三羥甲基氨基甲烷40～60mmol/L和聚乙二醇辛基苯基醚0.8～1.2v/v％。
8.根據權利要求1所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，樣本裂解的pH值為11～13；裂解的條件為常溫處理或加熱至90～100℃保溫。
9.根據權利要求8所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，樣本裂解的pH值為12～13；裂解的條件為常溫處理或加熱至90～100℃保溫。
10.根據權利要求1所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述乙醇溶液的濃度為90～98v/v％；乙醇溶液所加入的體積為裂解反應液體積的0.5～1.5倍。
11.根據權利要求10所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述乙醇溶液的濃度為95～98v/v％；乙醇溶液所加入的體積為裂解反應液體積的1～1.2倍。
12.根據權利要求1所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述清洗液濃度為5～35mmol/L的醋酸鈉溶液。
13.根據權利要求12所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述清洗液濃度為10～30mmol/L的醋酸鈉溶液。
14.根據權利要求12所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于，所述清洗液濃度為10～25mmol/L的醋酸鈉溶液。
15.根據權利要求1所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于所述洗脫液為濃度為0.25～1.25mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉溶液。
16.根據權利要求15所述的用于生物樣本的核酸提取的方法，其特征在于所述洗脫液為濃度為0.25～1mmol/L的乙二胺四乙酸二鈉溶液。
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