[發(fā)明專(zhuān)利]基于拉曼光譜生鮮雞肉中鮮味物質(zhì)肌苷酸的快速檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510410091.0
• 申請(qǐng)日: 2015-07-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105136767B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 介鄧飛;魏萱
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/65
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/65
• 代理公司: 武漢宇晨專(zhuān)利事務(wù)所42001
• 代理人: 黃瑞棠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及禽肉品質(zhì)與安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于拉曼光譜生鮮雞肉中鮮味物質(zhì)肌苷酸的快速檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

隨著人們生活水平的不斷提高和消費(fèi)意識(shí)的改變，消費(fèi)者對(duì)雞肉品質(zhì)的要求越來(lái)越高，對(duì)高端雞肉制品的需求也越來(lái)越大，人們也更加關(guān)注肉品的風(fēng)味、質(zhì)地、營(yíng)養(yǎng)、安全性等因素。雞肉品質(zhì)主要包括雞肉的顏色、風(fēng)味、持水性、pH值和嫩度等。其中，雞肉風(fēng)味品質(zhì)評(píng)價(jià)則一直是相關(guān)行業(yè)研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)，主要受主觀感覺(jué)和客觀技術(shù)等方面的限制。肌苷酸，又稱(chēng)次黃嘌呤核苷酸（Inosine Monophosphate，IMP），是動(dòng)物肌肉組織中重要的風(fēng)味物質(zhì)，其與雞肉類(lèi)食品鮮味的產(chǎn)生密切相關(guān)。研究已表明，肌肉中肌苷酸含量越高，雞肉的味道越鮮美，風(fēng)味也越好，肌苷酸含量已經(jīng)成為雞肉產(chǎn)品品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

傳統(tǒng)的生鮮雞肉肌苷酸含量檢測(cè)方法主要有毛細(xì)管電泳法、薄層層析法和高效液相色譜法。毛細(xì)管電泳法存在分離度偏低、肌苷和腺苷單磷酸等相似物質(zhì)的干擾問(wèn)題；薄層層析法操作步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)。HPLC方法較上述2種方法相對(duì)簡(jiǎn)單、測(cè)定精確，但仍然耗時(shí)耗力，難以實(shí)現(xiàn)在線檢測(cè)，需要利用高腐蝕性化學(xué)試劑進(jìn)行樣本前處理工作，既對(duì)環(huán)境造成污染又不能滿(mǎn)足雞肉品質(zhì)無(wú)損檢測(cè)、實(shí)時(shí)分級(jí)的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展需求。

光譜檢測(cè)技術(shù)由于避免了傳統(tǒng)化學(xué)方法破壞性、化學(xué)試劑污染和耗時(shí)耗力等缺點(diǎn)，在生鮮肉品質(zhì)檢測(cè)和安全評(píng)定上得到廣泛應(yīng)用，主要體現(xiàn)在生鮮肉的營(yíng)養(yǎng)成分分析、食用品質(zhì)檢測(cè)與分級(jí)、品種鑒定與判斷以及安全性評(píng)價(jià)等方面。生鮮雞肉肌苷酸鮮味物質(zhì)光譜檢測(cè)研究過(guò)程中主要存在信號(hào)難獲取以及具有肌苷酸相似基團(tuán)其他物質(zhì)會(huì)對(duì)肌苷酸特征光譜產(chǎn)生干擾等問(wèn)題，難以實(shí)現(xiàn)定量研究。近年來(lái)，隨著拉曼光譜學(xué)、儀器學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)、激光技術(shù)的不斷發(fā)展，各種拉曼光譜增強(qiáng)手段使得拉曼光譜技術(shù)的應(yīng)用范圍日益廣泛，在肉類(lèi)品質(zhì)檢驗(yàn)方面的應(yīng)用也開(kāi)始逐步增多。拉曼光譜具有快速、無(wú)損、環(huán)保以及水或醇溶液干擾小等特點(diǎn)，特別有利于生物樣本組織的檢測(cè)。生鮮雞肉樣本和肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比拉曼光譜中顯示出生鮮雞肉樣本中包含有豐富的信息和比較明顯匹配的譜峰。因此，采用該技術(shù)對(duì)生鮮雞肉肌苷酸進(jìn)行快速檢測(cè)分析具有可行性，利用優(yōu)選的光譜特征變量建立對(duì)肌苷酸的預(yù)測(cè)模型，計(jì)算速度快，準(zhǔn)確率較高，可以滿(mǎn)足對(duì)生鮮雞肉肌苷酸快速檢測(cè)的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決雞肉風(fēng)味品質(zhì)難以評(píng)價(jià)問(wèn)題，和基于傳統(tǒng)化學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)過(guò)程中難以快速大規(guī)模檢測(cè)肌苷酸含量等難題，提供一種基于拉曼光譜生鮮雞肉中鮮味物質(zhì)肌苷酸的快速檢測(cè)方法。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：

通過(guò)優(yōu)化拉曼光譜、比對(duì)肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)品和生鮮雞肉樣本拉曼光譜，優(yōu)選特征拉曼峰，對(duì)雞肉肌苷酸建立預(yù)測(cè)模型，提高檢測(cè)速度和效率。

具體地說(shuō)，本方法包括下列步驟：

①測(cè)定肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)品拉曼光譜

采用顯微共焦拉曼光譜儀檢測(cè)肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)品拉曼譜圖，設(shè)定激光波長(zhǎng)633nm，激光功率為17mW，曝光時(shí)間為10s，掃描次數(shù)平均值為3次，采集得到肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)品拉曼光譜，拉曼光譜范圍為1000-4000cm^-1；

②獲取生鮮雞肉樣本拉曼光譜

活禽宰殺后，取雞腿肉和雞胸肉，采用切片機(jī)根據(jù)雞肉紋理切取1mm厚薄均勻的雞肉切片樣本置于載玻片上，放置在顯微拉曼光譜儀載物臺(tái)后選擇自動(dòng)調(diào)節(jié)焦距調(diào)整顯微拉曼激光探頭，使樣本位于探頭正下方，多點(diǎn)采集樣本測(cè)量點(diǎn)，設(shè)定激光輸出功率為17mW，激光波長(zhǎng)為633nm，曝光時(shí)間為10s，掃描次數(shù)平均值為3次，獲取生鮮雞肉拉曼光譜；

③利用化學(xué)法測(cè)定肌苷酸含量

按照國(guó)標(biāo)GB/T19676-2005所述高效液相色譜法測(cè)定肌苷酸含量；

④進(jìn)行拉曼光譜校正

在Reinshaw軟件中去除樣本拉曼譜線中宇宙射線無(wú)關(guān)譜峰及Baseline基線校正后，將同一切片樣本不同采樣點(diǎn)采集光譜以水的特征頻譜作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正由于同一切片采樣微區(qū)含水量相等，則水的特征拉曼峰也應(yīng)相等，由此校正由于光強(qiáng)不穩(wěn)定及人工對(duì)焦差異等造成的光譜差異；

⑤優(yōu)選肌苷酸特征峰

對(duì)比分析IMP標(biāo)準(zhǔn)品及雞肉樣本拉曼光譜，分析雞肉拉曼光譜中IMP的拉曼光譜特征峰位置，通過(guò)對(duì)比可以得出3728.33、3701.06、3592.01、3063.17、2936.24、2645.46、2623.07、1518.87和1323.25cm^-1附近均比較明顯匹配的拉曼峰；

⑥計(jì)算特征拉曼峰面積