[發明專利]一種人NGAL蛋白重組表達及制備方法在審
| 申請號： | 201510399897.4 | 申請日： | 2015-07-08 |
| 公開（公告）號： | CN104988171A | 公開（公告）日： | 2015-10-21 |
| 發明（設計）人： | 孔毅榮;李小紅;劉強;于海雙 | 申請（專利權）人： | 北京嘉萬生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C07K14/47;C07K1/18;C07K16/18;C07K16/06 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 ngal 蛋白 重組 表達 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種人NGAL蛋白的重組表達方法，其特征在于，構建pColdTF-NGAL的表達載體，轉化表達菌株后，誘導菌體表達重組NGAL融合蛋白。
2.根據權利要求1所述NGAL融合蛋白的制備方法，其特征在于，表達質粒為pColdTFTMDNA原核表達載體，該原核表達載體表達的NGAL融合蛋白可利用金屬離子螯合親和柱進行純化。
3.根據權利要求1-2所述重組表達的NGAL融合蛋白，將其用于制備天然蛋白大小的重組NGAL的方法，其特征在于純化獲得重組表達的NGAL融合蛋白后，再將該融合蛋白進行蛋白酶酶切處理。
4.根據權利要求3所述的制備方法，所用的蛋白酶的特征在于，蛋白酶選自胰蛋白酶，凝血酶、Factor?Xa、HRV?3C酶中的任一種；所述蛋白酶包括天然提取及基因工程重組蛋白酶；本發明中優選蛋白酶為HRV?3C酶。
5.所述HRV?3C酶的酶切方法，其特征在于重組人NAGL融合蛋白與蛋白酶質量比為100∶1-1000∶1，酶切條件為4℃，作用時間為24-48h。
6.根據權利要求1-5所述的制備的重組NGAL蛋白在制備單克隆抗體、多抗血清及其在人NGAL檢測試劑中的應用。
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