[發明專利]脂質體流感病毒抗原疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201510397798.2
• 申請日: 2015-07-08
• 公開（公告）號: CN104983683A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K39/145;A61K39/295;A61P31/16
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技術領域

本發明涉及流感病毒抗原疫苗領域，特別涉及一種脂質體流感病毒抗原疫苗及其制備方法。

背景技術

現有技術中，用于治療流行性感冒的表位疫苗主要由化學合成，由于抗原表位僅代表了蛋白抗原的一部分，很難像蛋白抗原疫苗一樣誘導出多種免疫反應；且表位疫苗通常是線性的，不具備抗原蛋白上抗原表位所具有的立體構象。因而直接用表位肽免疫很難引起較強的免疫應答。雖然通過表位肽與載體分子連接后可在短期內誘導較好的免疫應答，但是很難保證其免疫應答的特異性，且為達到較好的免疫效果，一方面所需免疫原劑量大，另一方面需要聯合使用佐劑，使其進一步臨床應用受到很大限制。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，針對現有技術中表位疫苗難以誘導出多種免疫反應，且難以引起較強的免疫應答，臨床應用受到限制等缺陷，提供一種脂質體流感病毒抗原疫苗及其制備方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

本發明提供了一種脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，采用反相蒸發法，包括以下步驟：

(1)流感病毒抗原疫苗原液的制備：

取任意一種或多種流感病毒毒株，分別將所述流感病毒毒株接種于病毒培養基上，在33℃～35℃的溫度下培養48～72小時后，獲得流感病毒體,經甲醛滅活,超濾濃縮、納米對撞機裂解病毒及柱層析純化后制成流感病毒抗原疫苗原液；

(2)空脂質體的制備：

將磷脂、膽固醇以及抗氧化劑混合溶于有機溶劑中，減壓蒸發有機溶劑后，得到膜狀的空脂質體；

(3)單相分散體系的制備：

向步驟(2)中獲得的空脂質體中加入乙醚或與乙醚有相似溶解性和極性的有機溶劑溶解膜狀空脂質體形成雙相分散體系，然后加入堿性緩沖液，在水浴型超聲波處理器上超聲至混合物形成單相分散體系；

(4)成溶膠體系的制備：

將步驟(3)中獲得的混合物通過減壓蒸發去除乙醚至凝膠形成，然后繼續減壓蒸發形成水性懸濁液即脂質體懸液，繼續干燥去除乙醚，得到空脂質體，然后加入步驟(1)獲得的流感病毒抗原疫苗原液，獲得粗制脂質體；

(5)高壓勻漿

將步驟(4)獲得的粗制脂質體高壓勻漿,除菌過濾即可。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，所述步驟(4)中流感抗原疫苗原液在加入空脂質體之前還包括以下步驟：向流感病毒抗原疫苗原液中加入細胞保護劑。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，所述細胞保護劑為海藻糖，并使海藻糖在流感病毒抗原疫苗原液中的濃度為1％。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，所述堿性緩沖液為磷酸鹽緩沖液。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，所述流感病毒毒株包括甲1型、甲3型及乙型流感病毒毒株；所述病毒培養基為5-10日齡健康雞胚。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，所述磷脂包括大豆卵磷脂、卵磷脂、豆磷脂、腦磷脂、鞘髓磷脂、二鯨蠟磷酸酯中的一種或多種；

所述有機溶劑為三氯甲烷、氯仿、乙醚、丙酮溶液中的一種或多種；

所述抗氧化劑為維生素E、維生素C、維生素A、類胡蘿卜素中的一種或多種。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，所述空脂質體的制備過程為：

將大豆卵磷脂、維生素E、膽固醇分別按摩爾比(4-6)：1：(2-4)混合溶于100ml三氯甲烷中,置于旋轉蒸發儀的茄型瓶中,在60℃-100℃條件下水浴,真空旋轉蒸發,成膜，獲得膜狀空脂質體。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，取300mg注射用大豆卵磷脂、150mg膽固醇、50mg維生素E混合溶于100ml三氯甲烷中,將該液體置于旋轉蒸發儀的茄型瓶中,60℃水浴作為蒸發溫度,真空旋轉蒸發,獲得膜狀空脂質體。

在本發明提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法中，所述高壓勻漿過程為：將粗制脂質體用高壓勻漿機在壓力為15Kpa-30Kpa壓力范圍內，勻質5個循環，將脂質體顆粒粒徑勻質至200-400nm，除菌過濾。

本發明進一步保護根據上述提供的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法所獲得脂質體疫苗。