[發明專利]脂質體流感病毒抗原疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201510397798.2
• 申請日: 2015-07-08
• 公開（公告）號: CN104983683A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K39/145;A61K39/295;A61P31/16
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1.一種脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，采用反相蒸發法，包括以下步驟：

(1)流感病毒抗原疫苗原液的制備：

取任意一種或多種流感病毒毒株，分別將所述流感病毒毒株接種于病毒培養基上，在33℃～35℃的溫度下培養48～72小時后，獲得流感病毒體,經甲醛滅活,超濾濃縮、納米對撞機裂解病毒及柱層析純化后制成流感病毒抗原疫苗原液；

(2)空脂質體的制備：

將磷脂、膽固醇以及抗氧化劑混合溶于有機溶劑中，減壓蒸發有機溶劑后，得到膜狀的空脂質體；

(3)單相分散體系的制備：

向步驟(2)中獲得的空脂質體中加入乙醚溶解膜狀空脂質體形成雙相分散體系，然后加入堿性緩沖液，在水浴型超聲波處理器上超聲至混合物形成單相分散體系；

(4)成溶膠體系的制備：

將步驟(3)中獲得的混合物通過減壓蒸發去除乙醚至凝膠形成，然后繼續減壓蒸發形成脂質體懸液，繼續干燥去除乙醚，得到空脂質體，然后加入步驟(1)獲得的流感病毒抗原疫苗原液，獲得粗制脂質體；

(5)高壓勻漿

將步驟(4)獲得的粗制脂質體高壓勻漿,除菌過濾即可。

2.根據權利要求1所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中流感病毒抗原疫苗原液在加入空脂質體之前還包括以下步驟：向流感病毒抗原疫苗原液中加入細胞保護劑。

3.根據權利要求2所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述細胞保護劑為海藻糖，并使海藻糖在流感病毒抗原疫苗原液中的濃度為1％。

4.根據權利要求1所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述堿性緩沖液為磷酸鹽緩沖液。

5.根據權利要求1任一項所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述流感病毒毒株包括甲1型、甲3型及乙型流感病毒毒株；所述培養基為5-10日齡健康雞胚。

6.根據權利要求1所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述磷脂包括大豆卵磷脂、卵磷脂、豆磷脂、腦磷脂、鞘髓磷脂、二鯨蠟磷酸酯中的一種或多種；

所述有機溶劑為三氯甲烷、氯仿、乙醚、丙酮溶液中的一種或多種；

所述抗氧化劑為維生素E、維生素C、維生素A、類胡蘿卜素中的一種或多種。

7.根據權利要求1所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述空脂質體的制備過程為：

將大豆卵磷脂、維生素E、膽固醇分別按摩爾比(4-6)：1：(2-4)混合溶于100ml三氯甲烷中,置于旋轉蒸發儀的茄型瓶中,在60℃-100℃條件下水浴,真空旋轉蒸發,成膜，獲得膜狀空脂質體。

8.根據權利要求7所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)空脂質體的制備過程為：

取300mg注射用大豆卵磷脂、150mg膽固醇、50mg維生素E混合溶于100m?l三氯甲烷中,將該液體置于旋轉蒸發儀的茄型瓶中,60℃水浴作為蒸發溫度,真空旋轉蒸發,獲得膜狀空脂質體。

9.根據權利要求1-8任一項所述的脂質體流感病毒抗原疫苗的制備方法，其特征在于，所述高壓勻漿過程為：將粗制脂質體用高壓勻漿機在壓力為15Kpa-30Kpa壓力范圍內，勻質5個循環，將脂質體顆粒粒徑勻質至200-400nm，除菌過濾。

10.一種脂質體流感病毒抗原疫苗，其特征在于，包括如權利要求9任一項所述的脂質體流感病毒抗原疫苗制備方法所制得的脂質體流感病毒抗原疫苗。