[發(fā)明專利]一種凝血酶的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510397110.0 | 申請日： | 2015-07-08 |
| 公開（公告）號： | CN105002153B | 公開（公告）日： | 2019-03-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 黃耀江;蔣丹;劉宇;閆強;商宇 | 申請（專利權(quán)）人： | 黃耀江 |
| 主分類號： | C12N9/74 | 分類號： | C12N9/74 |
| 代理公司： | 北京三聚陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250 | 代理人： | 李敏 |
| 地址： | 100081 北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 殼聚糖 凝血酶 磁性微球 凝血酶原 肝素 陰離子樹脂 精氨酸 吸附 制備 生物工程技術(shù)領(lǐng)域 親和層析分離 生產(chǎn)周期 特異性純化 常溫常壓 工藝生產(chǎn) 抗凝血漿 吸附效果 工藝流程 比活性 可重復(fù) 酶活性 激活 應(yīng)用 | ||
1.一種凝血酶的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
(1)向血液中加入抗凝劑，離心分離，取上清抗凝血漿；
(2)向抗凝血漿中加入殼聚糖-精氨酸陰離子樹脂，攪拌吸附30-60min，過濾收集殼聚糖-精氨酸陰離子樹脂；用洗滌液洗滌殼聚糖-精氨酸陰離子樹脂2-3次；殼聚糖-精氨酸陰離子樹脂加入量為抗凝血漿質(zhì)量的0.5-3％；殼聚糖-精氨酸陰離子樹脂加入前用平衡液進行預(yù)平衡，方法為：將殼聚糖-精氨酸陰離子樹脂加入水中浸泡30-90min，用含0.08mol/LNaCl的0.05mol/L，pH 6.8-7.2的Tris-HCl緩沖液充分平衡；洗滌液為含0.1mol/L NaCl的0.05mol/L，pH 6.8-7.2的Tris-HCl緩沖液；
(3)將上述洗滌后的殼聚糖-精氨酸陰離子樹脂用洗脫液洗脫2-3次，收集洗脫液，得到凝血酶原溶液；洗脫液為含1mol/L NaCl的0.05mol/L，pH 6.8-7.2的Tris-HCl緩沖液；
(4)對凝血酶原進行激活，得凝血酶粗溶液；
(5)將肝素-殼聚糖親和磁性微球加入上述凝血酶粗溶液中，加入肝素-殼聚糖親和磁性微球加入量為凝血酶粗溶液質(zhì)量的0.5-2％，室溫緩慢攪拌吸附30-60min，磁鐵分離吸附液；用含0.1mol/L NaCl的0.05mol/L，pH 7.2的Tris-HCl緩沖液洗滌肝素-殼聚糖親和磁性微球，洗去雜蛋白，然后用含2mol/L NaCl的0.05mol/L，pH 7.2的Tris-HCl緩沖液作為洗脫液洗滌肝素-殼聚糖親和磁性微球，磁鐵分離收集洗脫液；
(6)將收集的洗脫液，超濾脫鹽濃縮，真空冷凍干燥得凝血酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝血酶的制備方法，其特征在于，所述抗凝劑為質(zhì)量濃度為3.8-4.5％的檸檬酸鈉溶液，加入量為血液體積的5-10％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝血酶的制備方法，其特征在于，凝血酶原進行激活的方法為；向凝血酶原溶液中加入CaCl2溶液，使其終濃度為Ca2+0.1mol/L，25℃下激活2小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝血酶的制備方法，其特征在于，將肝素-殼聚糖親和磁性微球加入凝血酶粗溶液前進行預(yù)處理：將肝素-殼聚糖親和磁性微球加入蒸餾水中溶脹1-3小時，用0.05mol/L，pH7.2的Tris-HCl緩沖液充分平衡洗滌。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝血酶的制備方法，其特征在于，所述血液為豬血、牛血、羊血或人血。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于黃耀江，未經(jīng)黃耀江許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201510397110.0/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
