[發(fā)明專利]一種制備脂肪二酸衍生物的方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510372328.0
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN105001140A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張偉;曹春來;肖擁軍;祝捷;周翠;林影
• 申請（專利權(quán)）人: 珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司
• 主分類號: C07D207/46
• 分類號: C07D207/46;C07K14/62
• 代理公司: 廣州市華學知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;蘇運貞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種制備脂肪二酸衍生物的方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

脂肪二酸衍生物在第三代胰島素藥物尤其是長效胰島素類似物的研究中發(fā)揮著重要作用，甘精胰島素作為長效胰島素類似物的重磅藥物在2014年全球銷售額達到72.79億美元。然而，甘精胰島素難以達到平穩(wěn)地控制血糖和穩(wěn)定的藥物動力學曲線，直接導致低血糖發(fā)生率尤其是夜間低血糖發(fā)生率偏高，危及生命。

近年來作為甘精胰島素替代藥物的長效胰島素類似物的研究逐漸成為糖尿病治療領(lǐng)域的熱點，其中公開號為CN1829738、名稱為“新型胰島素衍生物”的中國發(fā)明專利公開了脂肪二酸側(cè)鏈通過谷氨酸修飾的長效胰島素類似物——德谷胰島素；公開號為CN102065884、名稱為“聚乙二醇化的賴脯胰島素化合物”的中國發(fā)明專利公開了分子量約20kDa的聚乙二醇綴合的胰島素類似物；公開號WO?2011/122921的PCT申請公開了與免疫球蛋白Fc片段通過PEG偶聯(lián)的胰島素綴合物。Thibaudeau和Bridon公開了血清白蛋白偶聯(lián)的胰島素綴合物(Thibaudeau和Bridon等人，Bioconjugate?chemistry,2005,16,1000-1008)，在文章中作者聲稱該綴合物可以成為潛在的長效胰島素類似物候選藥。

在諸多長效胰島素類似物研究中，德谷胰島素半衰期最長，體內(nèi)作用時間超過42小時，同時低血糖風險尤其是夜間低血糖風險低，最有希望成為繼甘精胰島素之后的又一重磅藥物。德谷胰島素(Degludec，商品名為Tresiba)的分子結(jié)構(gòu)式如式I所示，其分子結(jié)構(gòu)特點在于長鏈脂肪二酸通過一個谷氨酸分子連接在胰島素B29位賴氨酸殘基上。

長鏈脂肪二酸衍生物的制備及修飾反應(yīng)成為了胰島素類似物制備工藝中的重要環(huán)節(jié)。在諾和諾德公司專利號CN1829738公開的十六烷二酸一叔丁酯制備工藝中采用了N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基縮醛作為叔丁酯化試劑，成本高，不適合工業(yè)放大；十六烷二酸琥珀酰亞胺基叔丁基酯制備工藝中采用了2-琥珀酰亞胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TSTU)，成本高，不適合工業(yè)化放大生產(chǎn)；同時該專利公開了十六烷二酸單甲酯衍生物,由于該工藝制備的胰島素類似物需要在0.2M?NaOH溶液中脫甲酯，容易引起胰島素肽鏈的分解，雜質(zhì)較多，同樣難以實現(xiàn)工業(yè)化放大生產(chǎn)。Grinstaff和Zhang公開了4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)縮合十二烷二酸和叔丁醇，制備十二烷二酸一叔丁酯的工藝(Grinstaff和Zhang等人，Bioconjugate?chemistry,2011,22(4),690-9)，而用該工藝制備十六烷二酸一叔丁酯生成的副產(chǎn)物十六烷二酸N-?；灞壤撸y以和產(chǎn)物分離，同樣不適合工藝放大生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種制備脂肪二酸衍生物的方法。該方法操作簡便、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)含量低、中間體純化容易，收率高。所制備的脂肪二酸衍生物可以通過蛋白修飾通用技術(shù)用于長效胰島素藥物如德谷胰島素的研發(fā)

本發(fā)明的另一目的在于提供所述制備脂肪二酸衍生物的方法的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：一種制備脂肪二酸衍生物的方法，包括如下步驟：

(1)將如式A所示的長鏈脂肪二酸和二氯亞砜反應(yīng)，得到如式B所示的帶有兩個氯基團的酰氯；接著將酰氯與叔丁醇反應(yīng)，得到如式C所示的帶有一個氯基團的酯；接著用羥基取代氯基團，得到如式D所示的長鏈脂肪二酸一叔丁酯；其中，下述反應(yīng)方程式中的m為6～32的整數(shù)，優(yōu)選為6～9；

(2)將長鏈脂肪二酸一叔丁酯和N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，得到如式E所示的長鏈脂肪二酸琥珀酰亞胺基叔丁基酯；

(3)將長鏈脂肪二酸琥珀酰亞胺基叔丁基酯與L-谷氨酸-1-叔丁酯反應(yīng)，得到如式F所示的叔丁基長鏈脂肪二酰基-L-Glu-OtBu；

(4)將叔丁基長鏈脂肪二?；?L-Glu-OtBu與N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)，得到如式G所示的叔丁基長鏈脂肪二酰基-L-Glu(OSu)-OtBu；

(5)將叔丁基長鏈脂肪二?；?L-Glu(OSu)-OtBu中的叔丁基去除，得到如式H所示的長鏈脂肪二酸衍生物。

步驟(1)中所述的二氯亞砜的用量為過量，即二氯亞砜和長鏈脂肪二酸的摩爾比大于2；優(yōu)選為6～23.6：1。