[發明專利]一種利用細胞工廠制備豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗的方法

在審

• 申請號: 201510370207.2
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN105106948A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發明（設計）人: 朱文革;鄭杰;張連祥;謝巧;朱秀芝;邢佳鵬;邵慶紅;韓莉
• 申請（專利權）人: 北京市獸醫生物藥品廠
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京名華博信知識產權代理有限公司 11453
• 代理人: 李冬梅;苗源

技術領域

本發明屬于疫苗技術領域，具體涉及一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗及其利用細胞工廠制備所述豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗的方法。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS，又稱豬藍耳病)，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種母豬繁殖障礙和各日齡豬呼吸疾病為特征的高度接觸性傳染病。藍耳病是目前影響世界養豬業最嚴重的疾病之一，自其被發現以來傳播迅速，危害性大，仔豬發病率可達100％，死亡率可達50％以上，母豬流產率可達30％以上，育肥豬也可發病死亡。

目前普遍使用的是用轉瓶培養細胞的傳統工藝，轉瓶培養具有結構簡單，投資少,技術成熟，重復性好，容易擴大等優點；但也有其缺點：勞動強度大，占地空間大，單位體積提供的細胞生長的面積小，細胞生長密度低，培養時監測和控制環境條件限制等缺點。

因此，本領域需要新的豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗及其制備方法和生產工藝。

發明內容

在本發明中，發明人提供了一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗及其利用細胞工廠制備所述豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗的方法。

在第一方面，本發明提供了一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗每20ml成品包括：

白油佐劑：12～14ml

病毒培養液：6～8ml

其中每ml豬繁殖與呼吸綜合征病毒含量不低于10^6.5TCID50。

在某些實施方案中，本發明的疫苗可以為油乳劑滅活疫苗

在第二方面，本發明提供了制備第一方面所述的疫苗的方法，所述方法包括：

(a)復蘇MARC-145細胞；

(b)將所述MARC-145細胞接種至細胞工廠進行單層培養；

(c)將豬繁殖與呼吸綜合征病毒接種于所培養的MARC-145細胞；和

(d)收獲接種后的MARC-145細胞；和

(e)將所收獲的MARC-145細胞培養液滅活，加入適量白油佐劑乳化獲得所述豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗。

在某些實施方案中，本發明的制備疫苗的方法可以包括：

(1)將MARC-145細胞懸浮于含5～8％牛血清的DMEM培養基中，之后再培養瓶中培養至90％以上的細胞貼壁；

(2)將步驟(1)中所培養的細胞用胰酶消化后接種至細胞工廠中，每層150ml-250ml細胞懸液，蓋好進液口蓋，放37℃溫室中靜止培養；

(3)細胞培養48～72小時后，棄去細胞工廠內培養基，接種所述的適量的豬繁殖與呼吸綜合征病毒，吸附1小時，吸附后加入維持液，將維持液分勻后放入37℃溫室中繼續培養；和

(4)培養至70％及以上的細胞出現致細胞病變效應時收獲所述MARC-145細胞，通過反復凍融細胞2次，將所述MARC-145細胞從細胞工廠壁上搖下過濾去除細胞碎片后，收集到無菌容器內；和

(5)加入適量的甲醛溶液，混勻，37℃滅活至少18個小時，獲得所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原，在抗原中加入適量白油，經過乳化獲得滅活疫苗。

在某些實施方案中，所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒可以是NVDC-JXA1株。

在某些實施方案中，將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒接種于所述MARC-145細胞的方法可以是將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的工作毒種接種于所述細胞工廠中培養的單層MARC-145細胞。

在某些實施方案中，將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒接種于所述MARC-145細胞的方法可以是將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的工作毒種接種于MARC-145細胞懸液中后分裝在所述細胞工廠中。

在某些實施方案中，可以按3％～5％接種所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒。

在某些實施方案中，滅活時可以按終濃度為0.1％～0.2％比例加入所述甲醛溶液。

在某些實施方案中，所述方法還可以包括將所述豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗以冷凍水循環的方式進行冷卻，并于4℃保存。

本發明的有益效果：

本發明采用NVDC-JXA1病毒株作為接種病毒株，并采用細胞工廠制備的豬繁殖與呼吸綜合癥滅活疫苗，所獲得的疫苗質量優良，免疫效力高，免疫效果穩定。

具體實施方式

下列實施例皆在進一步舉例描述本發明，而不是以任何方式限制本發明。在不背離本發明的精神及原則的前提下，對本領域普通技術人員容易實現的任何改動或改變都將本發明的待批權利要求范圍之內。