[發(fā)明專利]一種利用細胞工廠制備豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510370207.2
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN105106948A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發(fā)明（設計）人: 朱文革;鄭杰;張連祥;謝巧;朱秀芝;邢佳鵬;邵慶紅;韓莉
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市獸醫(yī)生物藥品廠
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京名華博信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11453
• 代理人: 李冬梅;苗源

1.一種豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗，其特征在于，每20ml成品包括：

白油佐劑：12--14ml

病毒培養(yǎng)液：6～8ml

其中每ml病毒培養(yǎng)液中豬繁殖與呼吸綜合征病毒含量不低于10^6.5TCID50。

2.如權(quán)利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗為油乳劑滅活疫苗。

3.制備如權(quán)利要求1或2所述的疫苗的方法，所述方法包括：

(a)復蘇MARC-145細胞；

(b)將所述MARC-145細胞接種至細胞工廠進行單層培養(yǎng)；

(c)將豬繁殖與呼吸綜合征病毒接種于所培養(yǎng)的MARC-145細胞；和

(d)收獲接種后的MARC-145細胞；和

(e)將所收獲的MARC-145細胞病毒培養(yǎng)液滅活加入適量白油乳化，獲得所述豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述方法包括：

(1)將MARC-145細胞懸浮于含8％牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，之后再培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至細胞單層達到90％以上；

(2)將步驟(1)中所培養(yǎng)的細胞用胰酶消化后接種至細胞工廠中，每層150ml-250ml細胞懸液，蓋好進液口蓋，放37℃溫室中靜止培養(yǎng)；

(3)細胞培養(yǎng)48～72小時后，待細胞單層達到70-90％以上，棄去細胞工廠內(nèi)培養(yǎng)基，接種所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒，吸附1小時，吸附后加入維持液，將維持液分勻后放入37℃溫室中繼續(xù)培養(yǎng)；

(4)培養(yǎng)至70％及以上的細胞出現(xiàn)致細胞病變效應時收獲所述MARC-145細胞，通過反復凍融細胞2次，將所述MARC-145細胞從細胞工廠壁上搖下過濾去除細胞碎片后，收集到無菌容器內(nèi)；和

(5)加入適量甲醛溶液，混勻，37℃滅活至少18個小時，獲得所述豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗。

5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其中所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒是NVDC-JXA1株。

6.如權(quán)利要求3至5中任一項所述的方法，其中將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒接種于所述MARC-145細胞的方法是將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的工作毒種接種于所述細胞工廠中培養(yǎng)的單層MARC-145細胞。

7.如權(quán)利要求3至5中任一項所述的方法，其中將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒接種于所述MARC-145細胞的方法是將所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒的工作毒種接種于MARC-145細胞懸液中后分裝在所述細胞工廠中。

8.如權(quán)利要求3至7中任一項所述的方法，其中按3％～5％接種所述豬繁殖與呼吸綜合征病毒。

9.如權(quán)利要求3至8中任一項所述的方法，其中滅活時按終濃度為0.1％～0.2％比例加入所述甲醛溶液。

10.如權(quán)利要求3至9中任一項所述的方法，其還包括將所述豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗以冷凍水循環(huán)的方式進行冷卻，并于4℃保存。