[發(fā)明專利]用于確定花粉群的花粉活力和/或成熟度的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510368787.1
• 申請日: 2015-03-05
• 公開（公告）號: CN105181560B
• 公開（公告）日: 2018-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: I·海德曼;M·迪貝拉爾迪諾;K·科克;G·沙德-坎普曼
• 申請（專利權(quán)）人: 安弗西斯股份公司
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;黃希貴

1.用于確定花粉群的花粉活力和/或成熟度的方法，包括：

從花中機(jī)械移取未成熟或成熟的花粉粒；

在緩沖液中重懸花粉粒，所述緩沖液具有使花粉在制備和測量期間保持存活，以及為通過使用阻抗式流式細(xì)胞術(shù)(IFC)的測量提供充分導(dǎo)電性的能力；

將細(xì)胞懸浮液通過具有適合于微流體設(shè)備的孔徑的適當(dāng)?shù)倪^濾器，所述微流體設(shè)備適配于實(shí)施阻抗式流式細(xì)胞術(shù)(IFC)；

將過濾的懸浮液通過針對各個(gè)花粉類型校準(zhǔn)的微流體設(shè)備，并以預(yù)定頻率測量花粉粒的阻抗；

存儲測量的各花粉粒的阻抗值以及測量頻率，所述阻抗值具有幅值及其相關(guān)相位角；

計(jì)數(shù)過濾的懸浮液中的花粉粒；以及

根據(jù)振幅和/或相位值，通過手工或自動設(shè)定合適的門控以鑒別花粉粒，并確定分析的花粉群的活性比非活性的比率或成熟度，

還包括通過以下鑒定植物細(xì)胞是活性還是非活性的：

將存儲的具有幅值和相位角值的阻抗值排列在x-y-矩陣中；

確定具有較低相位角和較高相位角的數(shù)據(jù)組之間的門控；

計(jì)數(shù)不同數(shù)據(jù)組的花粉粒阻抗值；

計(jì)算阻抗值的相位角低于門控的花粉量和阻抗值的相位角高于門控的花粉量之間的比率；

將所述比率與包含各花粉數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫的各比率比較，用于確定花粉的活力是否足以用于給定的特定目的；以及

展示該分析群體的結(jié)果；或

還包括通過以下鑒定成熟度：

確定幅值和/或角度值，作為測量頻率的函數(shù)；

將所述幅值和/或角度值與包含各花粉的數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)庫的各值比較；

將所述植物細(xì)胞鑒定為屬于特定的發(fā)育階段；以及

展示該分析群體的結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中將該植物細(xì)胞在阻抗式流式細(xì)胞儀(IFC)中的特定微流體芯片內(nèi)暴露于交流電(AC)場，所述交流電(AC)場的頻率范圍為0.1到600MHz。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述交流電(AC)場的頻率范圍為0.1到200MHz。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述交流電(AC)場的頻率范圍為0.25到30MHz。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中分析的植物細(xì)胞根據(jù)其不同的阻抗信號而分開，并用于下游過程。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中分析的植物細(xì)胞用于育種目的。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述結(jié)果用于種子產(chǎn)生過程和在種子產(chǎn)生過程期間使用，來控制植物細(xì)胞產(chǎn)生過程，或來檢測這些過程中的細(xì)菌、真菌或其他污染。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述結(jié)果用于選擇用于雄性可育性/不育性、耐熱性、耐鹽性和/或脅迫耐性的植物育種材料。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述結(jié)果用于優(yōu)化獲得具有最大活力的花粉所需的植物生長條件。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，還包括確定用于鑒定花粉的特征的觸發(fā)參數(shù)。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中確定分析的花粉群的活力或成熟度是實(shí)時(shí)實(shí)施的。

12.微流體設(shè)備在選擇用于雄性可育性/不育性、耐熱性、耐鹽性和/或脅迫耐性的植物育種材料期間，在種子產(chǎn)生過程期間分別通過鑒定植物細(xì)胞是活性還是非活性的和/或?qū)⒅参锛?xì)胞鑒定為屬于特定的發(fā)育階段而控制植物細(xì)胞產(chǎn)生過程，或檢測植物產(chǎn)生過程中的細(xì)菌、真菌或其他污染的用途，所述微流體設(shè)備包括至少一個(gè)特定微流體芯片并且適配于用交流電(AC)場實(shí)施阻抗式流式細(xì)胞術(shù)(IFC)，所述交流電(AC)場的頻率范圍為0.1到600MHz。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中所述交流電(AC)場的頻率范圍為0.1到200MHz。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其中所述交流電(AC)場的頻率范圍為0.25到30MHz。