[發明專利]油菜蜜酚類特征標識物的鑒別方法

在審

• 申請號: 201510368550.3
• 申請日: 2015-06-30
• 公開（公告）號: CN105372341A
• 公開（公告）日: 2016-03-02
• 發明（設計）人: 曹煒;趙靜;程妮;呂新剛
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 西安西達專利代理有限責任公司 61202
• 代理人: 謝鋼

技術領域

本發明涉及一種油菜蜜酚類特征標識物的鑒別方法，屬于食品科學領域。

背景技術

蜂蜜(honey)是蜜蜂采集蜜源植物分泌的花蜜釀造而成的天然甜物質。已有研究表明，蜂蜜具有抗菌、抗氧化、抗感染、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等功效，因此蜂蜜深受廣大消費者喜愛。然而，由于蜂蜜價格較高，目前國內市場上蜂蜜質量良莠不齊，一些不法商家在經濟利益驅使下，對蜂蜜進行摻假，以達到削減成本謀取暴利的目的。蜂蜜摻假包括兩種方式：(1)向天然蜂蜜產品中直接添加糖漿類物質；(2)將低價蜂蜜添加到或直接冒充高價蜂蜜出售，也稱為品種摻假。蜂蜜成分復雜且不同植物源的蜂蜜成分相近，因此蜂蜜品種摻假是蜂蜜摻假形式中最難鑒別的一種。蜂蜜中的酚類化合物種類及含量與蜜源植物的種類密切相關，確定不同種類蜂蜜的酚類標識物對于蜂蜜的品種摻假鑒別有重要意義。

油菜(BrassicacampestrisL.)適應性強，耐寒耐旱，作為蜜源植物在我國種植面積最廣，產量最大，素以“鐵蜜源”著稱。油菜花期為25-30天，開花時間東南、西南地區2至3月份，長江中下游地區3至4月份，黃河以北地區6至7月份。油菜蜜呈淺琥珀色，略混濁，有辛辣味和油菜花的香氣，極易結晶，結晶后呈乳白色。由于產量高，相對于其他品種的蜂蜜，油菜蜜價格低廉，故常被用來摻假到高價蜂蜜中。

發明內容

本發明目的是提供一種油菜蜜酚類特征標識物的鑒別方法，該方法使用高效液相色譜串聯二極管陣列檢測器(HPLC?DAD)確定油菜蜜的酚類特征標識物，使用四級桿飛行時間質譜儀對該酚類特征標識物分子量等信息進行鑒定，從而確定油菜蜜酚類特征標識物，為鑒別油菜蜜作為低價蜜摻入或直接冒充高價蜜出售提供可靠依據。

油菜蜜酚類特征標識物的確定是鑒別油菜蜜作為低價蜜摻入或直接冒充高價蜜出售的關鍵，為此，發明人開展了以下實驗：

（1）選取五種常見高價蜜包括棗花蜜、龍眼蜜、荔枝蜜、椴樹蜜和苕子蜜樣品加蒸餾水充分溶解，使用鹽酸溶液調節其pH值為2，得到蜂蜜樣品水溶液，將蜂蜜樣品水溶液注入有XAD?2型樹脂的層析柱內，依次用pH值為2的鹽酸水溶液和蒸餾水沖洗，去除糖類等極性物質，酚類化合物保留在樹脂上，用甲醇進行洗脫，通過減壓濃縮的方式去除甲醇洗脫液，所得殘留物用甲醇溶解、定容，配制成供試樣品溶液，密封后4℃避光保存；油菜蜜樣品做相同處理；

（2）使用HPLC-DAD對棗花蜜、龍眼蜜、荔枝蜜、椴樹蜜、苕子蜜和油菜蜜樣品的供試溶液進行測定分析，確定油菜蜜樣品保留時間為50.49min的特征色譜峰；

（3）采集不同產地的油菜蜜樣品，按照步驟（1）方法提取酚類化合物；

（4）使用HPLC-DAD對不同產地的油菜蜜樣品的供試溶液進行測定分析，保留時間為50.49min的色譜峰強度最大且出現在所有供試油菜蜜樣品溶液中；

（5）使用高分辨質譜儀QTOF-MS分析油菜蜜樣品中保留時間為50.49min的特征峰，得到該特征性化合物的分子量為362；

上述液相色譜條件為：色譜柱：ZorbaxSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)；流動相：0.15%的甲酸溶液和甲醇；流動相流速：1.0mL/min；洗脫方式：梯度洗脫；檢測波長：254nm、280nm、290nm、320nm；柱溫：30℃；

上述質譜條件為：離子源:電噴霧電離源(ESI);數據采集模式:負離子模式;數據采集范圍：m/z100~1000；離子源參數:裂解電壓：130V；毛細管電壓：4kV;載氣壓力：45psig;氣化室溫度350℃；干燥氣(N₂)體積流量10L/min。

通過上述實驗，發明人獲得了一種蜂蜜中油菜蜜酚類特征標識物的鑒別方法，包括以下步驟：

（1）將蜂蜜加蒸餾水充分溶解，使用鹽酸溶液調節其pH值為2，得到蜂蜜樣品水溶液，將蜂蜜樣品水溶液注入有XAD?2型樹脂的層析柱內，依次用pH值為2的鹽酸水溶液和蒸餾水沖洗，去除糖類等極性物質，酚類化合物保留在樹脂上，用甲醇進行洗脫，通過減壓濃縮的方式去除甲醇洗脫液，所得殘留物用甲醇溶解、定容，配制成供試樣品溶液，密封后4℃避光保存；