[發(fā)明專利]一種肺癌輻射抗性細(xì)胞株的構(gòu)建方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510367859.0
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104962548A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姚元虎;章龍珍;邱祥南;張偉;李浩;覃朝暉
• 申請（專利權(quán)）人: 徐州醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N5/09;C12R1/91
• 代理公司: 徐州市淮海專利事務(wù)所 32205
• 代理人: 華德明

1.一種肺癌輻射抗性細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

①將肺癌細(xì)胞置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)，當(dāng)其覆蓋培養(yǎng)瓶60～70％并處于對數(shù)生長期時，接種于六孔板中，把六孔板置于照射野中心，六孔板底面覆蓋1.5cm厚的組織等效填充物，照射源為醫(yī)用直線加速器，6MV-X線，機架旋轉(zhuǎn)180°，在室溫條件下射線從下方垂直入射，劑量率300cGy/min，源皮距SSD＝100cm，第1次予以2Gy照射；

②照射后更換新鮮培養(yǎng)基，待細(xì)胞覆蓋培養(yǎng)瓶80％以上時，胰酶消化，傳代兩次以上；

③傳代后置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2～3天，待細(xì)胞再次覆蓋培養(yǎng)瓶60～70％后，再次給予2Gy照射；

④每一次照射后的細(xì)胞均按上述步驟②和步驟③的方法傳代并培養(yǎng)至穩(wěn)定狀態(tài)后再進(jìn)行照射，依次增加照射劑量達(dá)4Gy、6Gy、8Gy和10Gy，每劑量均照射2次，總劑量達(dá)60Gy，繼續(xù)培養(yǎng)及傳代5代以上至細(xì)胞形態(tài)、增殖穩(wěn)定，凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.如權(quán)利要求1所述的肺癌輻射抗性細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述六孔板中每孔細(xì)胞接種量為5×10⁵個。

3.如權(quán)利要求1或2所述的肺癌輻射抗性細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述醫(yī)用直線加速器為Varian?23-EX醫(yī)用直線加速器。

4.如權(quán)利要求1或2所述的肺癌輻射抗性細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述X線的照射野大小為30cm×30cm。

5.如權(quán)利要求3所述的肺癌輻射抗性細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述X線的照射野大小為30cm×30cm。