[發明專利]一種采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法

在審

• 申請號: 201510367541.2
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104962531A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發明（設計）人: 姜瞻梅;許曉曦;劉麗麗;辛巖
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

1.一種采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于包含以下步驟：

(1)硫酸銨鹽析法分級提取乳過氧化物酶：

除去新鮮的牛乳中的脂肪和酪蛋白后得到乳清，在室溫條件下，向乳清中添加25-85％飽和度的硫酸銨，離心，去除沉淀，置于攪拌器上不斷攪拌使硫酸銨充分溶解，調節體系pH到5.5-8.5，放置2-10h使乳過氧化物酶完全沉淀，4℃5000-10000r/min離心20min到沉淀即為乳過氧化物酶制品；

(2)超濾：

將步驟(1)中得到的沉淀使用適量去離子水復溶用超濾膜進行超濾分離，以除去雜蛋白，收集截留溶液；

(3)脫鹽處理：

將步驟(2)收集的截留溶液裝入透析袋內進行脫鹽；

(4)干燥：

將步驟(3)脫鹽溶液冷凍干燥即制得乳過氧化物酶粗制品。

2.根據權利要求1所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(1)中使用硫酸銨飽和度為65％。

3.根據權利要求1所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(1)中使用硫酸銨分級沉淀鹽析，具體為使用先用飽和度25-35％的硫酸銨鹽析，離心，去除沉淀，上清液中繼續加硫酸銨至終飽和度為55-70％。

4.如權利要求3所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(1)中使用先用飽和度30％的硫酸銨鹽析，離心，去除沉淀，上清液中繼續加硫酸銨至終飽和度為65％。

5.如權利要求1所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(1)中離心轉速使用7000r/min。

6.如權利要求1所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(1)中硫酸銨鹽析時間為8h。

7.如權利要求1所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(1)鹽析體系pH為6.5。

8.如權利要求1所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(2)中使用分子量30-50kDa的超濾膜進行超濾分離，以除去部分分子量小于30-50kDa的雜蛋白，收集截留溶液，進而達到濃縮純化乳過氧化物酶的目的。

9.如權利要求8所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(2)中超濾所使用的超濾膜的分子量為30kDa。

10.如權利要求1所述的采用超濾法輔助硫酸銨鹽析提取乳過氧化物酶的方法，其特征在于：所述步驟(3)中將步驟(2)收集的截留溶液裝入分子量2-14kDa透析袋內進行脫鹽，每隔1-2h更換一次去離子水，透析3-4h即可。