[發(fā)明專利]cry1Ia基因及應(yīng)用、由其編碼的Cry1Ia蛋白及制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510367317.3
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104946668A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 成飛雪;劉勇;張德詠;宋志強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南省植物保護(hù)研究所
• 主分類號: C12N15/32
• 分類號: C12N15/32;C07K14/325;C12N15/70;A01N47/44;A01P5/00
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務(wù)所 43008
• 代理人: 趙洪;黃藝平

1.一種cry1Ia基因，其特征在于，所述cry1Ia基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

2.一種權(quán)利要求1所述cry1Ia基因在防治寄生線蟲中的應(yīng)用。

3.一種由權(quán)利要求1所述cry1Ia基因編碼的Cry1Ia蛋白。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的Cry1Ia蛋白，其特征在于，所述Cry1Ia蛋白的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2所示的序列。

5.一種權(quán)利要求3或4所述的Cry1Ia蛋白的制備方法，其特征在于，所述Cry1Ia蛋白的制備方法具體包括以下步驟：

S1、以SEQ?ID?NO.3所示的序列和SEQ?ID?NO.4所示的序列為引物，對所述cry1Ia基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到擴(kuò)增產(chǎn)物；

S2、將所述擴(kuò)增產(chǎn)物與載體連接得到重組子；

S3、將所述重組子轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中得到轉(zhuǎn)化子；

S4、將所述轉(zhuǎn)化子進(jìn)行活化、表達(dá)，得到Cry1Ia蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S4具體為：

S4-1、將所述轉(zhuǎn)化子涂布于LB平板中，培養(yǎng)過夜得到培養(yǎng)液；

S4-2、將所述培養(yǎng)液接種于LB培養(yǎng)基中進(jìn)行放大培養(yǎng)；

S4-3、加入誘導(dǎo)劑繼續(xù)培養(yǎng)4～12h；

S4-4、搜集所述步驟S4-3培養(yǎng)得到的菌體進(jìn)行超聲破碎、離心得到Cry1Ia蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S4-2中將所述培養(yǎng)液方法培養(yǎng)至OD600為0.6～0.7。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S4-3中，所述誘導(dǎo)劑為異丙基-β-D-硫代半乳糖苷；所述誘導(dǎo)劑的濃度為0.5mM；所述步驟S4-1中所述LB平板中含有100μg/L的氨芐青霉素。

9.一種權(quán)利要求3至4中任一項(xiàng)所述的Cry1Ia蛋白或權(quán)利要求5至8中任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的Cry1Ia蛋白在防治寄生線蟲中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述寄生線蟲為根結(jié)屬線蟲或孢囊屬線蟲。