[發明專利]絲狀真菌基因組的提取方法

在審

• 申請號: 201510364596.8
• 申請日: 2015-06-29
• 公開（公告）號: CN104946628A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發明（設計）人: 張春曉;韓梁彥;王麗麗
• 申請（專利權）人: 河北科技大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12R1/82;C12R1/685;C12R1/885;C12R1/80
• 代理公司: 石家莊旭昌知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 13126
• 代理人: 彭隨麗

1.一種絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

a、獲取絲狀真菌菌絲；

b、加入酶液：向絲狀真菌菌絲加入蝸牛酶和纖維素酶的混合酶液，得到絲狀真菌菌絲液；?

c、超聲處理：將步驟b獲得的絲狀真菌菌絲液于40~70W超聲5~15min；

d、酶解：將步驟c處理后的絲狀真菌菌絲液在25~40℃酶解10~15h，得到絲狀真菌菌絲酶解液；

e、將絲狀真菌菌絲酶解液靜置，待絲狀真菌菌絲酶解液分層后，獲得供PCR鑒定用含有絲狀真菌基因組的上清液；

在步驟a與步驟b之間或步驟d與步驟e之間，設有對絲狀真菌菌絲或絲狀真菌菌絲酶解液進行高溫加熱處理步驟，所述高溫加熱處理步驟中的加熱溫度為75~100℃，加熱時間為5~15min。

2.根據權利要求1所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述高溫加熱處理步驟中的加熱溫度為95~98℃，加熱時間為10~15min。

3.根據權利要求1所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述步驟e中絲狀真菌菌絲酶解液靜置前，用雙蒸水稀釋，混勻。

4.根據權利要求1所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述步驟b每0.05~0.1mg絲狀真菌菌絲加入混合酶液1mL，所述混合酶液中蝸牛酶濃度4~8mg/mL，纖維素酶濃度2000~6000U/mL。

5.根據權利要求4所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述混合酶液中蝸牛酶濃度6~8mg/mL，纖維素酶濃度2000~4000U/mL。

6.根據權利要求1所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述步驟b混合酶液的配制溶劑為滲透劑，所述滲透劑為0.7mol/L的NaCl溶液、1mol/L山梨醇溶液或裂解液中的一種，所述裂解液為50mM磷酸緩沖液，0.7mol/L?KCl，pH5.8的溶液。

7.根據權利要求1所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述步驟c的超聲功率為50W。

8.根據權利要求1所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述步驟d的酶解溫度為28℃，酶解時間為14h。

9.根據權利要求1-8中任一項所述的絲狀真菌基因組的提取方法，其特征在于：所述絲狀真菌為產黃青霉菌、黑曲霉菌、里氏木霉菌或桔青霉菌中的一種。