[發明專利]LAMP技術鑒別魚翅真偽用的引物及方法

有效

• 申請號: 201510363949.2
• 申請日: 2015-06-25
• 公開（公告）號: CN104946766B
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 陳定虎;陳祖華;王振華;劉恭源;熊仁廣;周敏;劉曉媚;張靜;馮雪雅;管維;吳穎兒
• 申請（專利權）人: 陳定虎
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 中山市興華粵專利代理有限公司44345
• 代理人: 吳劍鋒

技術領域

本發明涉及一種LAMP技術鑒別魚翅真偽用的引物,本發明還涉及一種采用上述引物鑒別魚翅真偽的方法，屬于生物技術領域。

背景技術

魚翅作為我國傳統的海產珍品，被譽為“海味八珍”之一，屬于高級滋補品，常與燕窩、鮑魚、海參等相提并論，它是魚翅是鯊、鰩、鮫的鰭或尾端部分，經過一系列復雜的加工過程精制而成,主要產于日本、墨西哥、巴西、非洲、中東、印度、南美洲及澳洲，我國的東海、南海也有出產，但是我國是主要的進口國，每年進口約3500噸各種形式的魚翅。

鯊魚隸屬于軟骨魚綱Chondrichthyes、板鰓亞綱Elasmobranchii、鯊目Selachoidei、星鯊屬Mustelus，是海洋生物鏈中最高層的重要魚類，全世界共有鯊魚約370種，可是用來割取魚翅的約20來種,由于其珍貴且稀有，加上市場對它的需求持續的增長，導致各類仿魚翅、參假魚翅等泛濫流行，極大地擾亂了我國市場次序，極大地侵害了消費者的權益，甚至危害了消費者的身體健康。急需研究靈敏度高且操作方便適合基層實驗室檢測的方法來打擊假冒偽劣魚翅產品，以保護消費者的合法權益。

目前國內外已有人報道用PCR和FINS方法來鑒定魚翅的種類，但存在PCR擴增片段過大難以擴增出來，還有設計的引物范圍不寬，存在漏檢的可能，而且PCR方法需要昂貴儀器設備，操作復雜。目前制備魚翅的主要鯊魚種類包括有犁頭沙KJ170949.1:Sphyrna lewini；JX827259.1,Sphyrna lewini；HM239662.1 Sphyrna lewini、平滑錘頭鯊KM489157.1 Sphyrna zygaena、公牛鯊KF646785.1 Carcharhinus leucas、灰色真鯊KC470543.1 Carcharhinus obscurus、黑翼鯊KJ720818.1 Carcharhinus melanopterus、白斑星鯊AB015962.1 Mustelus manazo、歐氏尖吻鯊EU528659.1 Mitsukurina owstoni、海洋白鰭鯊AY820736.1 Carcharhinus longimanus、褐星鯊EU099503.1 Mustelus henlei、KJ010763.1 Mustelus henlei、沙虎鯊KF569943.1 Carcharias taurus、大青鯊GU324148.1 Prionace glauca、鼬鯊KF111728.1 Galeocerdo cuvier、姥鯊KF597303.1 Cetorhinus maximus、灰星鯊KF889325.1 Mustelus griseus等鯊魚。

目前已有的檢測方法，其檢測步驟繁瑣，采用儀器昂貴，不能快速、方便的實現鑒別魚翅真偽。故此，現有鑒別魚翅真偽的檢測方法有待進一步完善。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術中的不足之處，提供一種LAMP技術鑒別魚翅真偽用的引物；

本發明另一個目的是提供一種采用上述引物鑒別魚翅真偽的方法，該方法具有快速、檢測靈敏度高、操作簡單、結果直接可以判讀等特點。

為了達到上述目的，本發明采用以下方案：

一種LAMP技術鑒別魚翅真偽用的引物，其特征在于包括：

正向外引物F3：5'-CAGGATTTCCTGATCAATG-3’；

反向外引物B3：5'-GTGTGAACTCAGATCACGT-3’；

正向內引物FIP：

5'-AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC-AACCAAGTTACCCTAGGGATA-3’；

其中所述正向內引物FIP包含F1c和F2序列：

F1c：AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC；

F2：AACCAAGTTACCCTAGGGATA

反向內引物BIP：

5'-TACGGCCTCGATGTTGGATC-AGGACTGTTAATCGTTGAACAA-3’

所述反向內引物BIP包括含B1c和B2序列：

B1c：TACGGCCTCGATGTTGGATC；

B2：AGGACTGTTAATCGTTGAACAA。

一種LAMP技術鑒別魚翅真偽的方法，其特征在于包括以下步驟：

A、魚翅DNA的提取

采用納米磁珠提取魚翅DNA；

B、建立LAMP反應體系