[發(fā)明專(zhuān)利]一種溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510363030.3
• 申請(qǐng)日: 2015-06-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105039209A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文國(guó)樑;曹煜成;李卓佳;胡曉娟;徐煜;徐創(chuàng)文
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12R1/085
• 代理公司: 廣州知友專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國(guó)華;劉艷麗

1.一種溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法，其特征是包括以下步驟：

(1)確定蠟樣芽孢桿菌CZBC1的多級(jí)聯(lián)通發(fā)酵罐培養(yǎng)的發(fā)酵培養(yǎng)基；

(2)活化培養(yǎng)：將保種的蠟樣芽孢桿菌CZBC1菌種進(jìn)行活化培養(yǎng)，得活化的蠟樣芽孢桿菌CZBC1；

(3)搖瓶種子液培養(yǎng)：將步驟(2)中活化好的蠟樣芽孢桿菌CZBC1置于種子瓶中，恒溫振蕩培養(yǎng)，得搖瓶種子液；

(4)多級(jí)聯(lián)通發(fā)酵罐培養(yǎng)：多級(jí)聯(lián)通發(fā)酵罐的大小依次為50L、500L和5000L，每個(gè)發(fā)酵罐中裝有步驟(1)中確定的發(fā)酵培養(yǎng)基，首先將搖瓶種子液接種到50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)至菌種濃度達(dá)到10⁹cfu/mL以上，接著取50L發(fā)酵罐中的種子液接種到500L發(fā)酵罐中繼續(xù)培養(yǎng)至菌種濃度達(dá)到10⁹cfu/mL以上，最后取500L發(fā)酵罐中的種子液接種到5000L發(fā)酵罐中繼續(xù)培養(yǎng)至芽孢數(shù)量達(dá)到10¹⁰個(gè)/mL以上，且芽孢的獲得率達(dá)到95％以上時(shí)，將發(fā)酵液引入離心機(jī)；

(5)菌泥制備及載體復(fù)合：將發(fā)酵液引入離心機(jī)離心后，取菌泥，將菌泥與載體混勻后經(jīng)包括干燥、粉碎、包裝和抽檢工序處理后，得蠟樣芽孢桿菌制劑產(chǎn)品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法，其特征是：步驟(1)中確定的蠟樣芽孢桿菌CZBC1的發(fā)酵培養(yǎng)基為在1L水中含有葡萄糖0.6g～8.5g、糖蜜0.6g～8.5g、酵母膏5～7g、蛋白胨5～7g、大豆蛋白18～23g、NaCl0.8～1.3g、KH₂PO₄0.15～0.3g和MgSO₄0.15～0.3g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化液體發(fā)酵方法，其特征是：步驟(2)中蠟樣芽孢桿菌CZBC1菌種進(jìn)行活化培養(yǎng)時(shí)采用的營(yíng)養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)肉湯固體培養(yǎng)基的pH6.50～7.20，28～30℃溫度活化培養(yǎng)18～24h；步驟(3)中恒溫振蕩培養(yǎng)時(shí)采用的培養(yǎng)液為營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基的pH6.50～7.20，180～230rpm，28～30℃恒溫振蕩培養(yǎng)18～24h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法，其特征是：步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基的體積占每個(gè)發(fā)酵罐總?cè)莘e的65～70％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法，其特征是：步驟(4)中將搖瓶種子液接種到50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)搖瓶種子液的接種量占發(fā)酵培養(yǎng)基總體積的3～5％，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為18～24h；取50L發(fā)酵罐中的種子液接種到500L發(fā)酵罐中繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)種子液的接種量占500L發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)基總體積的3～5％，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為18～24h；取500L發(fā)酵罐中的種子液接種到5000L發(fā)酵罐中繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)種子液的接種量占5000L發(fā)酵罐中發(fā)酵培養(yǎng)基總體積的3～5％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法，其特征是：步驟(4)中多級(jí)聯(lián)通發(fā)酵罐培養(yǎng)時(shí)，每次將種子液接種至發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)后，取樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室顯微鏡檢查，確認(rèn)菌種未受雜菌污染，然后再接種入下一發(fā)酵罐進(jìn)行接種培養(yǎng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法，其特征是：步驟(4)中采用無(wú)縫聯(lián)通導(dǎo)管將菌液引入離心機(jī)，步驟(5)中將菌液引入離心機(jī)離心時(shí)，單機(jī)單次裝載量為4～5kg，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為12000～15000rpm，離心時(shí)間為30～45min，獲得菌量超過(guò)8×10¹⁰cfu/mL的菌泥。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的溶解池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業(yè)化多級(jí)聯(lián)通液體發(fā)酵方法，其特征是：步驟(5)中菌泥與載體的質(zhì)量比為1:4～6，所述的載體為麩皮、沸石粉或輕質(zhì)碳酸鈣。