[發明專利]一種溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法

在審

• 申請號: 201510362557.4
• 申請日: 2015-06-25
• 公開（公告）號: CN105087426A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 曹煜成;李卓佳;文國樑;胡曉娟;徐煜;徐創文
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院南海水產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/085
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華;劉艷麗

1.一種溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是包括以下步驟：

(1)確定蠟樣芽孢桿菌CZBC1液體發酵的液體培養基和固體發酵的固體培養基；

(2)菌種活化培養：將保種的蠟樣芽孢桿菌CZBC1菌種進行活化培養；

(3)擴大培養：將活化好的蠟樣芽孢桿菌CZBC1菌種進行擴大培養，得種子液；

(4)液體發酵：將種子液接種到裝有步驟(1)中確定的液體培養基中進行液體發酵培養至芽孢數量達到10¹⁰個/mL以上，得液體發酵后的種子液；

(5)固體發酵：將步驟(4)獲得的液體發酵后的種子液接種至步驟(1)中確定的固體培養基中進行固體發酵培養至芽孢數量達到10⁹個/g以上，且芽孢獲得率達到90％以上，得固體發酵物；

(6)干燥、粉碎和包裝：將步驟(5)獲得的固體發酵物經包括干燥、粉碎和包裝工序處理后，即制得溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑。

2.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(1)中確定的蠟樣芽孢桿菌CZBC1液體發酵的液體培養基為在1L水中包括葡萄糖8～10g、玉米淀粉8～10g、酵母膏12～15g、氯化鈉4～7g，pH為7.2～7.5。

3.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(1)中確定的蠟樣芽孢桿菌CZBC1固體發酵的固體培養基由以下質量份配比的原料制成：麩皮58～70、豆粕18～25、玉米淀粉2.3～3.5、葡萄糖0.8～1.0、酵母粉1.2～1.5、磷酸二氫鉀0.15～0.25、硫酸鎂0.04～0.06、碳酸鈣1.5～2.0，pH為7.2～7.8。

4.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(2)中將保種的蠟樣芽孢桿菌CZBC1菌種進行活化培養時，培養基為營養肉湯固體培養基，營養肉湯固體培養基的pH為6.50～7.20，28～30℃活化培養18～24h。

5.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(3)中將活化好的蠟樣芽孢桿菌CZBC1菌種進行擴大培養時，培養基為營養肉湯液體培養基，營養肉湯液體培養基的pH值為6.50～7.20，28～30℃恒溫振蕩培養18～24h，轉速為180～230rpm。

6.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(4)中液體發酵培養時間為18～28h，溫度28～30℃。

7.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(4)中液體發酵培養后，取樣進行實驗室顯微鏡檢查，確認菌種未受雜菌污染，再將獲得的液體發酵后的種子液接種至步驟(1)中確定的固體培養基中。

8.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(5)中固體發酵培養采用壓力脈動固態發酵反應器，壓力脈動發酵的參數為：充壓2.5～3.5min，谷壓0.03～0.04MPa，維持9～11min峰壓0.25～0.30MPa維持19～21min，發酵時間為26～30h，發酵溫度為28～30℃。

9.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(6)中干燥采用流化床干燥，將固體發酵物置于流化床65～70℃烘干至水分10％以下。

10.根據權利要求1所述的溶解養殖池塘顫藻的蠟樣芽孢桿菌制劑的工業化液體—固體復合發酵方法，其特征是：步驟(6)中粉碎時粉碎機的孔徑為60～100目；包裝采用防潮鋁箔袋進行真空密封包裝。