[發明專利]檢測轉基因玉米CBH351的引物、試劑盒和方法

在審

• 申請號: 201510362507.6
• 申請日: 2015-06-25
• 公開（公告）號: CN104894282A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 蔡先全;李蓉;柏建山;邱德義;單振菊;周思渝;吳堅明;蕭綺倩;邱霞
• 申請（專利權）人: 蔡先全
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 中山市興華粵專利代理有限公司 44345
• 代理人: 吳劍鋒

技術領域

本發明設計一種檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein的雙重熒光PCR檢測試劑盒，本發明還涉及一種采用上述試劑盒檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein的方法。

背景技術

玉米是世界上最重要的糧食作物之一，在世界農業生產中占有重要位置。農業轉基因生物技術產業化的發展既是綜合國力和競爭力的標志，又是國家科技競爭優勢的重要標志。農業轉基因生物的推廣應用，降低了生產成本，減輕了環境污染，提高了產品價格競爭力。轉基因作物使產量增加，農藥使用量減少，形成了巨大經濟和生態效益。國際上對轉基因生物安全性的爭論已經不是純粹的科學技術問題，包含政治、經濟、倫理等諸多方面。很多國家將他們研究的轉基因物種拿到發展中國家中進行試驗研究。在轉基因產品的銷售過程中，經營者與消費者之間缺乏公平，消費者經常是在不知情或者是被動的情況下就進行了消費。由此，我們需要對食品及飼料中轉基因玉米的品系進行鑒定。為了加強對轉基因玉米特別是進口轉基因玉米的品系鑒定，根據歐盟轉基因品系準入相關文獻，建立食品和飼料中轉基因玉米品系檢測方法。CBH351Starlink?^TM玉米Z.mays是Aventis?Crop?Science即formerly?AgrEvo公司運用現代生物技術手段開發的一種轉基因玉米品系。其導入的來自蘇云桿菌Bt基因可產生一種蛋白質Cry9C,具有殺蟲活性,能夠有效控制歐洲鉆心螟蟲。

針對玉米中Zein基因和CBH351基因，研究人員已開展了常規PCR和熒光PCR方法研究。目前，我國出入境檢驗檢疫行業標準SN/T1196-2003《玉米種轉基因成分定性PCR檢測方法》中規定了對玉米MON810、Bt11、Evebt176、T14/T25、CBH351、GA21品系中轉基因成分的定性檢測。此外，農業部953號公告-2-2007《轉基因植物及其產品成分檢測抗蟲玉米CBH351及其衍生品種定性PCR方法》標準規定了轉基因抗蟲玉米CBH351CBH351及其衍生品種的檢測。這些基因的檢測方法大都采用常規PCR方法和熒光PCR方法。

但常規PCR方法需要PCR擴增后進行電泳，不僅操作繁瑣，而且容易引起污染，還需要使用可能致癌的熒光燃料。而探針法熒光PCR方法雖然靈敏準確，但TaqMan探針的線性結構導致了較高的背景熒光，如果熒光基團和淬滅基團的距離太近，在PCR擴增過程中,探針在它們之間降解的可能性將大為降低，從而起不到探針的作用。相反，如果熒光基團和淬滅基團分別置于探針兩端，熒光背景信號加強，影響其檢測的靈敏度。另外其合成成本較高，而且試劑有效期短，很容易降解，因而，不能在基層得到廣泛的應用。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術中的不足之處，提供一種用于檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein的引物；

本發明的另一個目的是提供一種包括上述引物且組分和配比合理，使用方便，檢測快捷，準確，適用于雙重熒光PCR檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein的試劑盒；

本發明另一個目的是提供一種采用上述試劑盒檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein，該方法操作簡便、快速，成本低，檢測結果準確。

為了達到上述目的，本發明采用以下方案：

一種檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein的引物，其特征在于該引物的序列分別為：

上游引物ZeinF：TTATGCTCCTTGGTCTTT

下游引物ZeinR：GTAATAGGGCTGATGATTG

上游引物CBH351F：TATGTTACTAGATCGCAGAT

下游引物CBH351R：AAGGTCCAATAGTGTATGT。

一種檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein及內源基因Zein的試劑盒，其特征在于該試劑盒中20μL反應體系包括以下組分：

其中所述上游引物ZeinF的序列：TTATGCTCCTTGGTCTTT

所述下游引物ZeinR的序列：GTAATAGGGCTGATGATTG

所述上游引物CBH351F的序列：TATGTTACTAGATCGCAGAT

所述下游引物CBH351R的序列：AAGGTCCAATAGTGTATGT。

如上所述的一種檢測轉基因抗蟲玉米CBH351及內源基因Zein的試劑盒，其特征在于該試劑盒中20μL反應體系包括以下組分：