[發明專利]一種神經外科手術后顱內細菌性感染常見致病細菌MLPA檢測探針及其應用

有效

• 申請號: 201510361873.X
• 申請日: 2015-06-26
• 公開（公告）號: CN105018601B
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 王明席;李云振;王慶波;姜濤
• 申請（專利權）人: 華僑大學;廈門柏嘉生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/14;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭

1.一種神經外科手術后顱內細菌性感染常見致病細菌MLPA檢測探針，其特征在于：包括第一組探針至第十七組探針，依序為檢測腦膜炎奈瑟氏菌、綠膿假單胞菌、沙門氏菌屬、嗜麥芽寡養單胞菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、克雷伯氏肺炎菌、粘質沙雷氏菌、魯氏不動桿菌、白喉桿菌、緩癥鏈球菌、鮑氏不動桿菌、肺炎鏈球菌、痤瘡丙酸桿菌、李斯特氏菌、陰溝腸桿菌和流感嗜血桿菌的探針，每組探針分別由左側探針LPO和右側探針RPO組成，所述左側探針由雜交序列和連接在雜交序列5’端的如SEQ ID NO 37所示的上游通用引物序列組成，所述右側探針由雜交序列、連接在雜交序列5’端的如SEQ ID NO 35所示的BsmI酶切位點序列、連接在雜交序列3’端的EcoR V酶切位點序列GATATC以及連接在EcoR V酶切位點序列3’端的SEQ ID NO 38的反向互補序列組成，其中，

第一組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 1所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 2所示；

第二組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 3所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 4所示；

第三組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 5所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 6所示；

第四組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 7所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 8所示；

第五組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 9所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 10所示；

第六組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 11所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 12所示；

第七組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 13所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 14所示；

第八組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 15所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 16所示；

第九組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 17所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 18所示；

第十組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 19所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 20所示；

第十一組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 21所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 22所示；

第十二組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 23所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 24所示；

第十三組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 25所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 26所示；

第十四組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 27所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 28所示；

第十五組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 29所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 30所示；

第十六組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 31所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 32所示；

第十七組探針的左側探針LPO的雜交序列如SEQ ID NO 33所示，右側探針RPO的雜交序列如SEQ ID NO 34所示。

2.一種神經外科手術后顱內細菌性感染常見致病細菌MLPA檢測試劑盒，其特征在于：包括權利要求1所述的探針。

3.如權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于：還包括一對通用引物，所述通用引物的上游引物和下游引物分別如SEQ ID NO 37和SEQ ID NO 38所示。

4.如權利要求3所述的檢測試劑盒，其特征在于：還包括Ligase-65、Ligase buffer、Probe Mix和PCR Primer Mix，其中，

Ligase-65的配方為：1U/μL，其儲存液為pH 7.5的20mM Tris，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA和50％(v/v)甘油；

Ligase buffer的配方為：10×Ligation Buffer：pH 7.8的400mM Tris，100mM MgCl₂，100mM DTT，5mM ATP；

Probe Mix的配方為：每個探針的濃度為4fM，工作液為pH 8.0的10mM Tris-Cl，1mMEDTA；

PCR Primer Mix的配方為：含有所述通用引物的上游引物和下游引物，dNTPs 2.5mM；工作液為pH 8.0的10mM Tris-Cl，1mM EDTA；每個引物的濃度為10pM，上游引物為Cy 5.0標記。