[發明專利]一種分離測定托伐普坦中多個雜質的液相色譜方法

有效

• 申請號: 201510354955.1
• 申請日: 2015-06-24
• 公開（公告）號: CN105004803A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: 夏玉立;孫毅
• 申請（專利權）人: 成都百裕科技制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽

技術領域

本發明屬于藥物分析領域，具體涉及一種分離測定托伐普坦中多個雜質的液相色譜方法。

背景技術

托伐普坦(Tolvaptan商品名：Samsca)，化學名為N-[4-[(5RS)-7-氯-5-羥基-2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮雜卓-1-甲?；鵠-3-甲基苯基]-2-甲基苯甲酰胺(分子量：C₂₆H₂₅ClN₂O₃)，化學結構式見式Ⅰ，是由日本大冢制藥公司(Otsuka?Pharm)開發的一種口服選擇性非肽類新型精氨酸加壓素V2受體拮抗劑。美國FDA于2009年5月批準其用于治療由充血性心力衰竭(CHF)、肝硬化以及抗利尿激素分泌不足綜合征所導致的高容性或等容性低鈉血癥(血鈉＜125mg/L，或者癥狀輕微)?？诜蟹テ仗蛊苊黠@減輕患者體重和水腫，且不破壞血電解質平衡，并能有效升高CHF患者并發的低鈉血癥。臨床研究表明，托伐普坦與其它抗心衰藥物相比耐受性好，治療中不必限制水的攝入，不良反應輕，應用前景廣闊。

托伐普坦可以通過下述路線合成：

其中，式Ⅳ所示的N-[4-[7-氯-5-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮雜卓-1-甲?；鵠-3-甲基苯基]-2-甲基苯甲酰胺(分子量：C₂₆H₂₃ClN₂O₃)是托伐普坦合成路線的重要中間體，同時也是托伐普坦的主要降解產物。

式(a)所示的鄰甲基苯甲酰氯，是合成托伐普坦的重要起始物料，式(b)所示的對甲基苯甲酰氯和式(c)所示的間甲基苯甲酰氯均為其位置異構體雜質。由于鄰甲基苯甲酰氯(a)在紫外光波長下無吸收，且較易水解，無法通過高效液相色譜法進行檢測。即使采用現有氣相色譜法進行檢測，也無法對其位置異構體雜質對甲基苯甲酰氯(b)和間甲基苯甲酰氯(c)進行質量控制。

因此，當對甲基苯甲酰氯(b)參與托伐普坦的合成反應，會生成式Ⅱ所示的N-[4-[7-氯-5-羥基-2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮雜卓-1-甲?；鵠-3-甲基苯基]-4-甲基苯甲酰胺和式Ⅴ所示的N-[4-[7-氯-5-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮雜卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-4-甲基苯甲酰胺；而間甲基苯甲酰氯(c)參與托伐普坦的合成反應，則生成式Ⅲ所示的N-[4-[7-氯-5-羥基-2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮雜卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-3-甲基苯甲酰胺和式Ⅵ所示的N-[4-[7-氯-5-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-苯并[b]氮雜卓-1-甲酰基]-3-甲基苯基]-3-甲基苯甲酰胺。

可見，由于鄰甲基苯甲酰氯中含有難以控制的位置異構體雜質，會導致式Ⅳ化合物含有雜質Ⅴ、Ⅵ，這些雜質會在制備托伐普坦的反應中分別生成式Ⅱ和式Ⅲ化合物。因此，以上五個雜質的存在對托伐普坦的臨床用藥安全構成了潛在的威脅。然而，僅有托伐普坦噴霧干燥粉質量標準的復核說明(標準號：JX20110046)報道了雜質Ⅳ的檢測。而托伐普坦Ⅰ的位置異構體雜質Ⅱ、Ⅲ以及托伐普坦中間體Ⅳ的位置異構體雜質Ⅴ和Ⅵ的檢測方法的并未見相關報道。

因此，實現托伐普坦的位置異構體雜質及托伐普坦中間體的位置異構體雜質的分離測定對于托伐普坦質量控制方面具有現實意義。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種分離測定托伐普坦中多個雜質的液相色譜方法，實現了托伐普坦及其五個雜質的分離測定。包括以下步驟：

(1)獲得各雜質對照品的保留時間以及峰面積與濃度的對應關系：

a、分別取雜質Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的對照品，加入溶劑溶解，作為對照品溶液，分別注入高效液相色譜儀進行檢測，檢測條件為：

檢測波長：230nm～280nm；

色譜柱：Symmetry?shield?RP18；

流動相：乙腈-含有0.2％磷酸的水溶液，其中，乙腈的體積分數為43-47％；

b、記錄各雜質相應的保留時間、濃度和峰面積；

(2)檢測待測樣品：

c、取待測托伐普坦樣品，加入溶劑溶解，作為供試品溶液，注入高效液相色譜儀進行檢測，以步驟a相同的檢測條件檢測；

d、根據步驟b的結果確定步驟c所得譜圖中的各峰歸屬，記錄供試品溶液中雜質Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ的峰面積，按外標法計算供試品中雜質Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ的含量。