[發明專利]一種基于原位形成光活性納米材料模擬酶的堿性磷酸酯酶活性檢測方法

有效

• 申請號: 201510348969.2
• 申請日: 2015-06-23
• 公開（公告）號: CN104897846A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 王光麗;金璐怡;吳秀明;曹根霞
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N31/10
• 分類號: G01N31/10;G01N21/33;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于原位形成光活性納米材料模擬酶的堿性磷酸酯酶活性檢測方法，其特征在于：

a、二氧化鈦納米材料的制備：將5mL含鈦化合物逐滴加入到75mL超純水中，混合后的溶液在室溫下持續攪拌。然后將上述溶液轉移到反應釜內并加熱到160℃持續24h。離心獲得產物并用超純水洗滌多次，最后烘干獲得白色二氧化鈦納米顆粒；

b、堿性磷酸酯酶活性的測定：5μmol/L的堿性磷酸酯酶的底物與10μL不同濃度的堿性磷酸酯酶混合后加入到96孔板中，室溫下反應一段時間；加入10μL?1.5mg/mL的二氧化鈦納米材料反應15min后，加入100μL?pH為4.0的0.2mol/L的醋酸緩沖溶液和20μL?5mmol/L的納米材料模擬酶的特征底物，放置在氙燈下用可見光(λ≥400nm)照射10min后，在酶標儀上測定吸收光譜或者熒光光譜。

2.根據權利要求1所述的一種基于原位形成光活性納米材料模擬酶的堿性磷酸酯酶活性檢測方法，其特征在于所示制備二氧化鈦納米材料時選用的原料，選自鈦酸四丁酯、四氯化鈦。

3.根據權利要求1所述的一種基于原位形成光活性納米材料模擬酶的堿性磷酸酯酶活性檢測方法，其特征在于所述的堿性磷酸酯酶的底物，選自于鄰苯二酚磷酸酯、水楊酸磷酸酯。

4.根據權利要求1所述的一種基于原位形成光活性納米材料模擬酶的堿性磷酸酯酶活性檢測方法，其特征在于所述的納米材料模擬酶的特征底物有3,3’,5,5’―四甲基聯苯胺、2,2’-聯氮基雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽、10-乙酰基-3,7-二羥基吩嗪。