[發明專利]能夠鑒定吳江香青菜的ISSR?SCAR標記及其鑒定方法

有效

• 申請號: 201510344812.2
• 申請日: 2015-06-19
• 公開（公告）號: CN104894124B
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發明（設計）人: 林一波;張艷梅;沈雪林;孫小芹;戴華軍;杭悅宇;曹敏旭
• 申請（專利權）人: 蘇州市種子管理站
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司32200
• 代理人: 曹毅

1.能夠在吳江香青菜中擴增得到的特異性DNA片段，其特征在于該片段的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所述。

2.一組能夠鑒別吳江香青菜的SCAR引物，其特征在于該引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所述。

3.一種吳江香青菜的DNA分子鑒別方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟：利用序列為SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示的SCAR引物，對吳江香青菜的DNA樣品用PCR反應體系進行擴增，通過瓊脂糖凝膠電泳對PCR產物進行鑒別：電泳結果中出現一條1181bp條帶的樣品為香青菜，而相同部位沒有出現條帶的樣品則不是香青菜。

4.根據權利要求3所述的一種吳江香青菜的DNA分子鑒別方法，其特征在于該PCR反應體系為20 μl，其組分及終濃度為：濃度為20 ng/μl的DNA模板1.0 μl，2×反應混合物10.0 μl，其中含20 mM Tris-HCl，100 mM KCl，3 mM MgCl₂，400 μM的dNTPs，溴酚藍，10 mM的引物各0.8 μl，2.5U/μl 的Taq DNA 聚合酶0.4 μl，最后用雙蒸水補齊至20 μl；PCR擴增程序為：94℃，5min預變性；94℃變性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，30個循環；最后72℃延伸8 min；PCR擴增產物經1.0％瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色，電壓80V，電泳0.5h后用凝膠成像系統觀察、拍照，用2000 bp的DNA ladder作為分子量標記。