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[發(fā)明專利]能夠鑒定吳江香青菜的ISSR?SCAR標(biāo)記及其鑒定方法有效

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201510344812.2 申請(qǐng)日: 2015-06-19
公開(公告)號(hào): CN104894124B 公開(公告)日: 2017-09-12
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 林一波;張艷梅;沈雪林;孫小芹;戴華軍;杭悅宇;曹敏旭 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 蘇州市種子管理站
主分類號(hào): C12N15/11 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/68
代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司32200 代理人: 曹毅
地址: 215000 江*** 國(guó)省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 能夠 鑒定 吳江 青菜 issr scar 標(biāo)記 及其 方法
【權(quán)利要求書】:

1.能夠在吳江香青菜中擴(kuò)增得到的特異性DNA片段,其特征在于該片段的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所述。

2.一組能夠鑒別吳江香青菜的SCAR引物,其特征在于該引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所述。

3.一種吳江香青菜的DNA分子鑒別方法,其特征在于所述的方法包括以下步驟:利用序列為SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示的SCAR引物,對(duì)吳江香青菜的DNA樣品用PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒別:電泳結(jié)果中出現(xiàn)一條1181bp條帶的樣品為香青菜,而相同部位沒有出現(xiàn)條帶的樣品則不是香青菜。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種吳江香青菜的DNA分子鑒別方法,其特征在于該P(yáng)CR反應(yīng)體系為20 μl,其組分及終濃度為:濃度為20 ng/μl的DNA模板1.0 μl,2×反應(yīng)混合物10.0 μl,其中含20 mM Tris-HCl,100 mM KCl,3 mM MgCl2,400 μM的dNTPs,溴酚藍(lán),10 mM的引物各0.8 μl,2.5U/μl 的Taq DNA 聚合酶0.4 μl,最后用雙蒸水補(bǔ)齊至20 μl;PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃,5min預(yù)變性;94℃變性45s,55℃退火45s,72℃延伸1min,30個(gè)循環(huán);最后72℃延伸8 min;PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠染色,電壓80V,電泳0.5h后用凝膠成像系統(tǒng)觀察、拍照,用2000 bp的DNA ladder作為分子量標(biāo)記。

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