[發(fā)明專利]能夠鑒定吳江香青菜的ISSR?SCAR標(biāo)記及其鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510344812.2
• 申請(qǐng)日: 2015-06-19
• 公開（公告）號(hào): CN104894124B
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林一波;張艷梅;沈雪林;孫小芹;戴華軍;杭悅宇;曹敏旭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州市種子管理站
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司32200
• 代理人: 曹毅

1.能夠在吳江香青菜中擴(kuò)增得到的特異性DNA片段，其特征在于該片段的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所述。

2.一組能夠鑒別吳江香青菜的SCAR引物，其特征在于該引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所述。

3.一種吳江香青菜的DNA分子鑒別方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟：利用序列為SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示的SCAR引物，對(duì)吳江香青菜的DNA樣品用PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒別：電泳結(jié)果中出現(xiàn)一條1181bp條帶的樣品為香青菜，而相同部位沒有出現(xiàn)條帶的樣品則不是香青菜。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種吳江香青菜的DNA分子鑒別方法，其特征在于該P(yáng)CR反應(yīng)體系為20 μl，其組分及終濃度為：濃度為20 ng/μl的DNA模板1.0 μl，2×反應(yīng)混合物10.0 μl，其中含20 mM Tris-HCl，100 mM KCl，3 mM MgCl₂，400 μM的dNTPs，溴酚藍(lán)，10 mM的引物各0.8 μl，2.5U/μl 的Taq DNA 聚合酶0.4 μl，最后用雙蒸水補(bǔ)齊至20 μl；PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃，5min預(yù)變性；94℃變性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸8 min；PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0％瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色，電壓80V，電泳0.5h后用凝膠成像系統(tǒng)觀察、拍照，用2000 bp的DNA ladder作為分子量標(biāo)記。