[發明專利]一種基于足點域和雜交鏈式反應測定T?2毒素的方法

有效

• 申請號: 201510324989.6
• 申請日: 2015-06-12
• 公開（公告）號: CN105021593B
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 混旭;王林鵬;王周平
• 申請（專利權）人: 青島科技大學;江南大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 青島中天匯智知識產權代理有限公司37241
• 代理人: 萬桂斌

技術領域

本發明屬于化學發光技術領域，具體為一種基于足點域和雜交鏈式反應測定T-2毒素的方法。

背景技術

T-2毒素是由多種真菌，主要是三線鐮刀菌產生的單端孢霉烯族化合物(trichothecenes，TS)之一。它廣泛分布于自然界，是常見的污染田間作物和庫存谷物的主要毒素，對人、畜危害較大。迄今還沒有對T-2毒素中毒的特異性防治辦法。目前唯一有效的預防辦法是避免接觸或減少接觸。近年來T-2毒素測定方法主要有：氣相色譜法(李德安,周宏博,李群偉,孟憲清.氣相色譜儀寬口徑毛細管柱檢測谷物中T-2毒素方法.中國地方病學雜志,Chinese Jouranl of Cndemiology,2000年01期,69-70)；膠體金免疫層析法(徐小婧,王俊平,王霄雪,談超,王碩,張燕.T-2毒素膠體金免疫層析快速檢測試紙條的研制.食品研究與開發,Food Research and Development,2013年17期,96-99)固相萃取-超高效液相色譜-質譜聯用法(趙艷華，林妮妮，郭磊，陳佳，劉萬卉，謝劍煒.固相萃取-超高效液相色譜-質譜聯用技術檢測大鼠血漿中T-2毒素及其主要代謝產物.分析化學,Chinese Journal of Analytical Chemistry,2012年12期,1852-1858)；表面等離子共振法(Meneely JP,Sulyok M,Baumgartner S,Krska R,Elliott CT.A rapid optical immunoassay for the screening of T-2 and HT-2 toxin in cereals and maize-based baby food.Talanta.2010,81(1-2):630-636)；熒光法(Lippolis V,Pascale M,Maragos CM,Visconti A.Improvement of detection sensitivity of T-2 and HT-2 toxins using different fluorescent labeling reagents by high-performance liquid chromatography.Talanta.2008,74(5):1476-1483)；液相-質譜聯用技術(Sun Y,Zhang G,Zhao H,Zheng J,Hu F,Fang B.Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for toxicokinetics,tissue distribution,and excretion studies of T-2 toxin and its major metabolites in pigs.J Chromatogr B.2014,958:75-82)等。

但是，這些方法的各有其缺點，本發明利用磁珠為載體，以FITC為標記物，利用足點域和雜交鏈式反應為原理，以光致化學發光為檢測方法，實現了T-2毒素的測定，具有方法簡單、成本低、靈敏度高的優點。

發明內容

本發明目的是提供一種簡單而靈敏的測定T-2毒素的方法，利用磁珠為載體，以FITC為標記物，利用足點域和雜交鏈式反應為原理，以光致化學發光為檢測方法，實現了T-2毒素的測定。

技術方案

一種基于足點域和雜交鏈式反應測定T-2毒素的方法，其特征在于用磁珠為載體，以FITC為標記物，利用足點域和雜交鏈式反應為原理，以光致化學發光為檢測方法，實現了T-2毒素的測定，測定步驟如下：

(1)取10μL鏈霉親和素修飾磁珠至1mL離心管中，并用100μL pH 8.0的Tris-HCl緩沖溶液清洗兩遍，并分散到100μL的Tris-HCl緩沖溶液中；發卡DNA在使用之前在95℃條件下孵化2min，然后逐步降溫至室溫備用；

(2)在盛有10μL磁珠的1mL的離心管中加入100μL pH 6.8的磷酸緩沖溶液，然后加入10μL 1.0×10^-5M生物素化的Seq.16，并在37℃下振蕩反應1h，然后，再加入10μL 1.0×10^-5MDNA1，得到Seq.16/DNA1修飾的磁珠，并用磷酸緩沖溶液洗滌3遍，并分散于100μL的磷酸緩沖溶液中；