[發明專利]基于IPMA的小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510324242.0
• 申請日: 2015-06-12
• 公開（公告）號: CN104991061B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 步志高;劉文興;陳偉業
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12N5/10;C12R1/91
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 陳曉娜

1.基于免疫過氧化物酶細胞單層試驗的小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒，所述試劑盒包括：

包含細胞內陽性抗原與陰性抗原的96孔細胞培養板；

陽性對照血清和陰性對照血清；

樣品稀釋液；

鹽水洗滌液；

HRP標記鼠抗羊McAb；

二組分AEC顯色液，和終止液；

血清稀釋板和使用說明書；

其中，所述細胞內陽性抗原為小反芻獸疫病毒rPPRV/GFP感染的BHK-gSLAM細胞，所述細胞內陰性抗原為未感染小反芻獸疫病毒的BHK-gSLAM細胞；

所述陽性對照血清為小反芻獸疫病毒疫苗株PPRV?N75/1免疫山羊后采血，分離獲得的免疫陽性血清，中和效價在1∶160以上；

所述陰性對照血清為小反芻獸疫陰性山羊未經免疫直接采血，分離獲得的陰性血清。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其中所述BHK-gSLAM細胞為保藏號為CGMCC?No.10587的細胞。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其中所述含細胞內陽性抗原與陰性抗原的96孔細胞培養板通過下述步驟制備：

(1)將BHK-gSLAM細胞在96孔細胞培養板內培養，待其長成單層后，以接種rPPRV/GFP病毒的BHK-gSLAM細胞作為陽性抗原，同時以未接毒的BHK-gSLAM細胞作為陰性抗原；

(2)當接毒孔內受感染的BHK-gSLAM細胞達到15～30％時，棄去細胞板內生長培養液，終止細胞培養；

(3)用0.15M鹽水溶液洗滌細胞板后，用預冷的4％多聚甲醛溶液對所述細胞板在室溫固定10分鐘，棄去多聚甲醛固定液；

(4)洗板后，加入3％魚皮膠溶液對所述細胞板在37℃封閉2小時，棄去封閉液；在37℃干燥1～2小時后，將所述細胞板密封，4℃保存或-20℃凍存備用。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其中所述樣品稀釋液為含4％馬血清和0.5％吐溫80的0.5M氯化鈉溶液，pH?7.2；

所述鹽水洗滌液為含0.5％吐溫80的0.15M氯化鈉溶液；

所述二組分AEC顯色液由A液和B液按1∶1的體積比組成，其中A液由下述組成：50mg?3-氨基-9-乙基咔唑，2.5ml?N，N-二甲基甲酰胺和47.5ml醋酸溶液，pH?5.0；B液由50ml純水和20μl雙氧水組成；

所述終止液為0.05M醋酸溶液，pH?5.0。

5.穩定表達山羊SLAM蛋白的BHK-21細胞系BHK-gSLAM，其保藏號為CGMCC?No.10587。