[發(fā)明專(zhuān)利]一種烏洛托品分子印跡固相萃取柱的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510318557.4
• 申請(qǐng)日: 2015-06-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104888740B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐幸;張曉鳴;舒平;狄家衛(wèi);張燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 大理州質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測(cè)中心
• 主分類(lèi)號(hào): B01J20/285
• 分類(lèi)號(hào): B01J20/285;B01J20/30;B01D15/08;G01N30/08
• 代理公司: 昆明正原專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司53100
• 代理人: 陳左

技術(shù)領(lǐng)域：本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種烏洛托品分子印跡固相萃取柱的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

烏洛托品化學(xué)名稱(chēng)為六亞甲基四胺，純品為白色細(xì)粒狀結(jié)晶，分子式為C₆H₁₂N₄，工業(yè)上可用作酚醛塑料的固化劑、氨基塑料的催化劑等，由于其在酸性溶液中能分解放出甲醛和氨而具有殺菌作用，醫(yī)學(xué)上常用于泌尿系統(tǒng)的消毒劑。有研究表明烏洛托品具有中等毒性，刺激皮膚，能引起皮炎及皮膚濕疹。由于烏洛托品具有殺菌作用，近年來(lái)，在執(zhí)法過(guò)程中發(fā)現(xiàn)部分食品生產(chǎn)商，將其應(yīng)用于食品的生產(chǎn)，添加到米線(xiàn)和腐竹等食品中，促使其色澤光亮，保質(zhì)期長(zhǎng)。2010年3月烏洛托品被全國(guó)食品安全整頓工作辦公室列入食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單(第四批)。

在食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域中，樣品前處理的效果直接關(guān)系到分析結(jié)果的確準(zhǔn)性，固相萃取技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的一種新型樣品前處理技術(shù)，主要用于樣品的分離、純化和富集，能更有效地將待測(cè)組分與樣品基體或干擾物質(zhì)分離，簡(jiǎn)化樣品前處理的步驟，避免了使用大量有機(jī)溶劑，具有操作簡(jiǎn)便、快速、分離效率高等優(yōu)點(diǎn)。在食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域中已被廣泛應(yīng)用，成為樣品分離純化的重要技術(shù)。

目前常用的固相萃取柱通常為硅膠基質(zhì)的填料、離子交換型填料、有機(jī)基質(zhì)的填料和無(wú)機(jī)吸附型的填料等。這些填料的特異性不強(qiáng)，分離度較低，分子印跡固相萃取技術(shù)，利用分子印跡聚合物的特異性吸附機(jī)理制備固相萃取填料，由于分子印跡聚合物對(duì)模板分子具有特異選擇性和親合性，可以克服食品基質(zhì)的復(fù)雜性，實(shí)現(xiàn)低濃度目標(biāo)物的分離與富集，提高固相萃取的凈化效果及分析檢測(cè)技術(shù)的準(zhǔn)確度。

發(fā)明內(nèi)容：

為了解決傳統(tǒng)的固相萃取柱分離富集烏洛托品效果不佳的缺陷，本發(fā)明提供了一種新的烏洛托品分子印跡固相萃取柱的制備方法，并優(yōu)化確定了該發(fā)明固相萃取柱的使用條件。

技術(shù)方案：

烏洛托品分子印跡固相萃取柱的制備方法，該方法的步驟如下：

（1）將模板分子烏洛托品、功能單體2-甲基丙烯酸、交聯(lián)劑2-甲基-2-丙烯酸-1,2-乙二醇酯，充分溶解于致孔劑中，再加入引發(fā)劑2,2'-偶氮二異丁腈。模板與功能單體的摩爾比為1:6，功能單體與交聯(lián)劑的摩爾比為1:10，引發(fā)劑與功能單體的摩爾比為1:20，致孔劑為比例為1:1的甲醇/乙腈；

（2）向混合溶液中充入氮?dú)獬酰荛]后于50℃水浴條件下振蕩反應(yīng)8小時(shí)，取出塊狀聚合物研磨，過(guò)100~200目篩，收集聚合物顆粒，采用比例為1:4的乙酸/甲醇混合溶劑對(duì)聚合物顆粒抽提18小時(shí)，除去多余的模板分子，再用純甲醇抽提6小時(shí)，60℃真空干燥得到烏洛托品分子印跡固相萃取填料；

（3）將上述的烏洛托品分子印跡固相萃取填料應(yīng)用于制備固相萃取柱，將100~500mg的烏洛托品分子印跡聚合物，填充于固相萃取空柱內(nèi)，兩端分別裝上聚乙烯篩板，該萃取柱的體積為3~6mL。

將上述的烏洛托品分子印跡固相萃取柱應(yīng)用于食品檢測(cè)中，分離富集食品中的烏洛托品，具體的應(yīng)用包括以下步驟：

（1）固相萃取柱裝填好后，依次用1個(gè)柱體積的甲醇和1個(gè)柱體積的乙醇活化柱體；

（2）稱(chēng)取食品樣品5~10g，加入50mL提取溶劑甲醇、乙醇、乙腈、水中的一種或兩種的混合溶劑，振蕩混勻，快速定性濾紙過(guò)濾，收集濾液用于凈化；

（3）取1~2個(gè)柱體積的樣品提取液上樣注入固相萃取柱；

（4）用1個(gè)柱體積的乙醚清洗柱體，以除去食品基質(zhì)中的雜質(zhì)；

（5）最后用2~3個(gè)柱體積的甲醇、乙醇、乙腈、水中的一種或兩種的混合溶劑為洗脫溶劑，洗脫烏洛托品，收集洗脫液，采用液相色譜儀或液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定。

進(jìn)一步地，一種烏洛托品分子印跡固相萃取柱在食品檢測(cè)中的應(yīng)用，操作步驟如下：

（1）向已使用過(guò)的烏洛托品分子印跡固相萃取柱中，注入3~5個(gè)柱體積的比例為1:4的乙酸/甲醇混合溶劑，清洗柱體內(nèi)殘留的烏洛托品分子與雜質(zhì)；

（2）用2~3個(gè)柱體積的甲醇清洗柱體，以除去殘留的乙酸；

（3）按上述方法處理后的分子印跡固相萃取柱，可再次應(yīng)用于食品中烏洛托品的分離、富集與純化。