[發明專利]一種用于鑒定紫花前胡的引物對及其應用

有效

• 申請號: 201510315809.8
• 申請日: 2015-06-10
• 公開（公告）號: CN104894270B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 黃璐琦;袁媛;趙群
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,張立娜

1.用于鑒定或輔助鑒定紫花前胡的引物對，其特征在于：所述引物對為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對。

2.用于鑒定或輔助鑒定紫花前胡的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權利要求1所述的引物對、dNTP和DNA聚合酶。

3.制備權利要求1所述引物對的方法，包括將組成所述引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝的步驟。

4.制備權利要求2所述試劑盒的方法，包括如下步驟：將組成所述引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝后，與分別單獨包裝的dNTP和DNA聚合酶包裝于同一個試劑盒內。

5.權利要求1所述的引物對或權利要求2所述的試劑盒在鑒定或輔助鑒定紫花前胡中的應用。

6.利用權利要求1所述的引物對或權利要求2所述的試劑盒鑒定或輔助鑒定待測樣品中是否含有紫花前胡的方法，包括如下步驟：

(a)從待測樣品中提取基因組DNA作為模板，采用權利要求1所述的引物對進行PCR擴增；

(b)根據步驟(a)所得PCR產物的大小，按照如下方法確定所述待測樣品中是否含有紫花前胡：若PCR產物中含有200-300bp的DNA片段，則所述待測樣品中含有或候選含有紫花前胡；若PCR產物中不含有200-300bp的DNA片段，則所述待測樣品中不含有或候選不含有紫花前胡。

7.利用權利要求1所述的引物對或權利要求2所述的試劑盒鑒定或輔助鑒定待測樣品為紫花前胡，還是前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種的方法，包括如下步驟：

(a)從待測樣品中提取基因組DNA作為模板，采用權利要求1所述的引物對進行PCR擴增；

(b)根據步驟(a)所得PCR產物的大小，按照如下方法確定所述待測樣品為紫花前胡，還是前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種：若PCR產物中含有200-300bp的DNA片段，則所述待測樣品為或候選為紫花前胡；若PCR產物中不含有200-300bp的DNA片段，則所述待測樣品為或候選為前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種；

所述待測樣品為紫花前胡、前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：在步驟(a)中，進行所述PCR擴增時采用的退火溫度為55℃。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：進行所述PCR擴增時采用的擴增程序為：95℃5min；95℃25s，55℃30s，72℃30s，25個循環；72℃10min。

10.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述200-300bp的DNA片段為252bp的DNA片段；

所述252bp的DNA片段具體為序列表中序列3所示的DNA片段。