[發明專利]一種用于鑒定紫花前胡的引物對及其應用

有效

• 申請號: 201510315809.8
• 申請日: 2015-06-10
• 公開（公告）號: CN104894270B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 黃璐琦;袁媛;趙群
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,張立娜

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，涉及中藥及中藥材鑒定領域，特別涉及一種用于鑒定紫花前胡的引物對及其應用。

背景技術

紫花前胡為傘形科植物紫花前胡Peucedanum decursivum(Miq.)Maxim.的干燥根。藥理研究表明，紫花前胡揮發油的醇提物具有抑制癌細胞的生長和代謝作用。近年來，紫花前胡藥材因其獨特的藥理活性備受關注，市場上偽品也較多，如濱海前胡、碎葉山芹、前胡、蕨葉藁本、異葉茴芹、石防風、短片藁本等。

因紫花前胡藥材與同科或同屬混偽品的形態特征比較相近，外形鑒別比較困難，采用傳統的鑒定方法有一定的局限，因此，亟需尋找一種快速、準確的鑒定方法，以確保前胡藥材鑒定的準確性熊永興等采用的DNA條形碼技術對前胡及其混偽品進行鑒定(侯典云、宋經元，楊培，周紅，辛天怡，姚輝，基于ITS2序列鑒別前胡和紫花前胡藥材及混偽品，中國中藥雜志，2014,39(21)：4186)，但該方法耗時較長，且使用大型儀器，不利于實現快速、現場檢測。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種用于鑒定或輔助鑒定紫花前胡的引物對。

本發明所提供的用于鑒定或輔助鑒定紫花前胡的引物對為由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成的引物對。

所述引物對中，兩條單鏈DNA分子既可以分別單獨包裝，也可以按照摩爾比為1:1的比例混合后包裝在一起。

本發明的第二個目的是提供一種用于鑒定或輔助鑒定紫花前胡的試劑盒。

本發明所提供的用于鑒定或輔助鑒定紫花前胡的試劑盒，具體可含有所述引物對、dNTP和DNA聚合酶。

制備所述引物對的方法也屬于本發明的保護范圍。

制備所述引物對的方法，具體可包括將組成所述引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝的步驟。

制備所述試劑盒的方法也屬于本發明的保護范圍。

制備所述試劑盒的方法，具體可包括如下步驟：將組成所述引物對的兩條單鏈DNA分子分別單獨包裝后，與分別單獨包裝的dNTP和DNA聚合酶包裝于同一個試劑盒內。

所述引物對或所述試劑盒在鑒定或輔助鑒定紫花前胡中的應用也屬于本發明的保護范圍。

本發明的第三個目的是提供一種利用所述引物對或所述試劑盒鑒定或輔助鑒定待測樣品中是否含有紫花前胡的方法。

本發明所提供的利用所述引物對或所述試劑盒鑒定或輔助鑒定待測樣品中是否含有紫花前胡的方法，具體可包括如下步驟：

(a)從待測樣品中提取基因組DNA作為模板，采用所述引物對進行PCR擴增；

(b)根據步驟(a)所得PCR產物的大小，按照如下方法確定所述待測樣品中是否含有紫花前胡：若PCR產物中含有200-300bp(如252bp)的DNA片段，則所述待測樣品中含有或候選含有紫花前胡；若PCR產物中不含有200-300bp(如252bp)的DNA片段，則所述待測樣品中不含有或候選不含有紫花前胡。

在所述方法中，所述紫花前胡為中藥材。當然所述方法也可以用于檢測紫花前胡的基原植物——紫花前胡Peucedanum decursivum(Miq.)Maxim.。相應的，所述待測樣品既可為單一或混合的中藥材成品，也可以為植株或取自所述植株的組織或器官。

本發明的第四個目的是提供一種利用所述引物對或所述試劑盒鑒定或輔助鑒定待測樣品為紫花前胡，還是前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種的方法。

本發明所提供的利用所述引物對或所述試劑盒鑒定或輔助鑒定待測樣品為紫花前胡，還是前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種的方法，具體可包括如下步驟：

(a)從待測樣品中提取基因組DNA作為模板，采用所述引物對進行PCR擴增；

(b)根據步驟(a)所得PCR產物的大小，按照如下方法確定所述待測樣品為紫花前胡，還是前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種：若PCR產物中含有200-300bp的DNA片段，則所述待測樣品為或候選為紫花前胡；若PCR產物中不含有200-300bp的DNA片段，則所述待測樣品為或候選為前胡、毛前胡、信前胡、濱海前胡、華中前胡、石防風、短片藁本、碎葉山芹、蕨葉藁本和異葉茴芹中的任一種；