[發明專利]一種合成利西拉來的方法

有效

• 申請號: 201510315186.4
• 申請日: 2015-06-10
• 公開（公告）號: CN104844706B
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 文永均;郭德文;曾德志;童光彬
• 申請（專利權）人: 成都圣諾生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種合成利西拉來的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His側鏈上偶聯有保護基的多肽片段1；

合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Glu側鏈上偶聯有保護基的多肽片段2；

合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段3；

合成在SEQ ID NO:4所示氨基酸序列N端、Ser側鏈上偶聯有保護基的多肽片段4；

合成在SEQ ID NO:5所示氨基酸序列N端偶聯有保護基的多肽片段5；

步驟2、將N端、Lys側鏈上偶聯有保護基的保護Lys，在縮合試劑和活化試劑作用下和氨基樹脂偶聯，形成肽樹脂1，從肽樹脂1的N端出發，按照SEQ ID NO:6所示氨基酸序列C端到N端的順序，在縮合試劑和活化試劑作用下，逐一偶聯保護氨基酸，形成肽樹脂2，所述氨基樹脂為Fmoc-Rink Linker-氨基樹脂；

步驟3、在縮合試劑和活化試劑作用下，將多肽片段5的C端和肽樹脂2的N端偶聯形成肽樹脂3，然后將多肽片段4的C端和肽樹脂3的N端偶聯形成肽樹脂4；

步驟4、在縮合試劑和活化試劑作用下，將N端偶聯有保護基的保護Pro的C端和肽樹脂4的N端偶聯形成肽樹脂5，然后將多肽片段3的C端和肽樹脂5的N端偶聯形成肽樹脂6；

步驟5、在縮合試劑和活化試劑作用下，從肽樹脂6的N端出發，按照SEQ ID NO:7所示氨基酸序列C端到N端的順序，逐一偶聯保護氨基酸，形成肽樹脂7；

步驟6、在縮合試劑和活化試劑作用下，將多肽片段2的C端和肽樹脂7的N端偶聯形成肽樹脂8，然后多肽片段1的C端和肽樹脂8的N端偶聯形成利西拉來樹脂；

步驟7、利西拉來樹脂酸解脫除C端樹脂和所有保護基得到利西拉來粗品，粗品純化轉醋酸鹽，獲得利西拉來成品，所述酸解采用由體積百分比為80-95％的TFA、體積百分比為1-10％的EDT、余量為水組成的混合酸解液酸解。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述多肽片段1-多肽片段5均通過固相合成法或液相合成法合成。

3.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述多肽片段1為Fmoc/Boc-His(Trt)-Gly-OH，多肽片段2為Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH，多肽片段4為Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH，多肽片段5為Fmoc-Gly-Ala-OH，多肽片段3為Fmoc-Gly-Gly-OH。

4.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟2所述保護氨基酸為Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH。

5.根據權利要求1所述方法，其特征在于，步驟5所述保護氨基酸為Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH。

6.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述縮合試劑為N,N-二異丙基碳二亞胺、N,N-二環己基碳二亞胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有機堿、2-(7-氮雜-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有機堿、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽/有機堿、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有機堿中的一種。

7.根據權利要求6所述方法，其特征在于，所述有機堿為N,N-二異丙基乙胺、三乙胺或N-甲基嗎啡啉。

8.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述活化試劑為1-羥基苯并三唑或N-羥基-7-氮雜苯并三氮唑。

9.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述粗品純化轉醋酸鹽具體為：

利西拉來粗品用醋酸溶解后采用高效液相色譜法進行純化，獲得利西拉來純化中間體濃縮液，然后以流動相系統為1％醋酸/水溶液-乙腈，以高效液相色譜法進行轉醋酸鹽。