[發明專利]一種定量分析煙草花瓣中14種類黃酮物質的檢測方法

有效

• 申請號: 201510314816.6
• 申請日: 2015-06-10
• 公開（公告）號: CN104865337B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 李勇;逄濤;師君麗;陳萍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業)53116
• 代理人: 謝喬良,何曉鈞

技術領域

本發明屬于分析檢測技術領域，具體涉及一種定量分析煙草花瓣中14種類黃酮物質的檢測方法。

背景技術

類黃酮物質(flavonoids)是指兩個苯環通過中央三碳原子相互連接的一系列化合物, 它們廣泛分布于植物界，是植物重要的次生代謝產物。類黃酮物質已在很多植物體中被證明與植物的抗蟲和抗病相關。同時，黃酮類化合物是一類生物活性很強的化合物，是一種天然的抗氧化劑，在醫藥、食品等領域具有廣泛的應用。例如，槲皮素-3-O-蕓香糖苷（蕓香苷，維生素p）是臨床上用于防治腦溢血、高血壓、視網膜出血、紫瘢和急性出血性腎炎等疾病的重要藥物。

煙草花瓣中含有豐富的類黃酮物質，但目前人們對煙草花瓣中類黃酮物質的研究和利用的報道較少。隨著人們對煙草中類黃酮物質關注的增加，建立一種類黃酮物質全面定量分析方法變得十分必要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種定量分析煙草花瓣中14種類黃酮物質的檢測方法。

本發明的目的是這樣實現的，包括樣品前處理、供試品溶液的制備、對照品溶液的制備和測定步驟，具體包括：

A、樣品前處理：將待檢樣品煙草花瓣研磨、冷凍干燥后置于1~4℃保存備用；

B、供試品溶液的制備：準確稱取10.0mg的前處理后的樣品，加入1ml的甲醇-氯仿-水提取溶液和200μl的內標溶液，內標溶液為黃豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，濃度為1.0μg/mL，經超聲處理、離心后取上清液作為供試品溶液；

C、對照品溶液的制備：分別精密稱定各標準化合物，即14個標準樣品和3個內標物黃豆苷元、染料木苷和橙皮苷，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，得到1mg/ml的類黃酮單標溶液，分別移取100μl 1mg/ml的低濃度類黃酮單標溶液以及10mg/ml的高濃度類黃酮單標溶液于100ml容量瓶中，以樣品提取溶液，即甲醇-氯仿-水提取溶液定容制備得到標準混合溶液，以樣品提取溶液逐級稀釋標準混合溶液，制成低濃度類黃酮物質濃度為1000、600、400、100、60、40、10、6、4、1ng/mL，體積為1mL的標準溶液梯度；此梯度對應的高濃度標準溶液梯度為100、60、40、10、6、4、1、0.6、0.4、0.1μg/mL；在上述所有濃度梯度的溶液中加入200μl的內標溶液得到對照品溶液，內標溶液為黃豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，濃度為1.0μg/mL；

D、測定：經色譜質譜分析，以待測14個類黃酮化合物的含量為橫坐標，以其對應的色譜峰面積與內標化合物的色譜峰面積的比值為縱坐標，建立工作曲線，對校正數據進行線性回歸，求得類黃酮物質的回歸方程，試樣中類黃酮物質的含量按下式進行計算：

式中：c為煙草花瓣樣品中類黃酮物質的含量，單位μg/g；

x為儀器測得的萃取液的濃度，單位為μg/mL。

本發明基于發明人2014年從煙草的葉和花中鑒定出17種類黃酮物質，其中9種為煙草中首次被鑒定出來，使得建立了其中14種類黃酮物質的定量分析方法，本發明方法的建立對于開展煙草花瓣中類黃酮物質的相關研究具有重要意義。

附圖說明

圖1為本發明煙草花瓣樣品的類黃酮物質分離總離子流色譜圖。

具體實施方式

下面結合實施例和附圖對本發明作進一步的說明，但不以任何方式對本發明加以限制，基于本發明教導所作的任何變換或替換，均屬于本發明的保護范圍。

本發明所述的定量分析煙草花瓣中14種類黃酮物質的檢測方法，包括樣品前處理、供試品溶液的制備、對照品溶液的制備和測定步驟，具體包括：

A、樣品前處理：將待檢樣品煙草花瓣研磨、冷凍干燥后置于1~4℃保存備用；

B、供試品溶液的制備：準確稱取10.0mg的前處理后的樣品，加入1ml的甲醇-氯仿-水提取溶液和200μl的內標溶液，內標溶液為黃豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，濃度為1.0μg/mL，經超聲處理、離心后取上清液作為供試品溶液；