[發明專利]一種定量分析煙草花瓣中14種類黃酮物質的檢測方法

有效

• 申請號: 201510314816.6
• 申請日: 2015-06-10
• 公開（公告）號: CN104865337B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 李勇;逄濤;師君麗;陳萍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業)53116
• 代理人: 謝喬良,何曉鈞

1.一種定量分析煙草花瓣中14種類黃酮物質的檢測方法，其特征在于所述14種類黃酮物質為二氫山奈酚、二氫槲皮素、山奈酚、槲皮素、柚皮素、蕓香苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、異鼠李素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、木犀草素、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、柚皮素-7-O-葡萄糖苷；所述檢測方法包括樣品前處理、供試品溶液的制備、對照品溶液的制備和測定步驟，具體包括：

A、樣品前處理：將待檢樣品煙草花瓣研磨、冷凍干燥后置于1~4℃保存備用；

B、供試品溶液的制備：準確稱取10.0mg的前處理后的樣品，加入體積比5:2:2的甲醇-氯仿-水提取劑1mL和內標溶液200μL，內標溶液為黃豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，內標溶液濃度為1.0μg/mL，超聲30min、離心后取上清液作為供試品溶液；

C、對照品溶液的制備：分別精密稱定各標準化合物，即14個標準樣品和3個內標物黃豆苷元、染料木苷和橙皮苷，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，得到1mg/mL的類黃酮單標溶液，分別移取100μL 1mg/mL的低濃度類黃酮單標溶液以及10mL 1mg/mL的高濃度類黃酮單標溶液于100mL容量瓶中，以樣品提取溶液，即甲醇-氯仿-水提取溶液定容制備得到標準混合溶液，以樣品提取溶液逐級稀釋標準混合溶液，制成低濃度類黃酮物質濃度為1000、600、400、100、60、40、10、6、4、1ng/mL，體積為1mL的標準溶液梯度；此梯度對應的高濃度標準溶液梯度為100、60、40、10、6、4、1、0.6、0.4、0.1μg/mL；在上述所有濃度梯度的溶液中加入200μL的內標溶液得到對照品溶液，內標溶液為黃豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，濃度為1.0μg/mL；

D、測定：進行色譜質譜分析，色譜分析條件：15cm×2.1mm、1.7μm粒徑的Waters BEH C18色譜柱；A相，水；B相，乙腈，兩相均添加0.1%的甲酸和0.2mmol/L的醋酸銨；流動性梯度，0-1min，10%B；1-9min，10%B-90%B；9-11min，90%B-100%B；11-11.1min，100%B-10%B；11.1-13min，保持10%B；柱溫30℃，進樣量2μL，流速0.25mL/min；質譜分析條件：電噴霧電離離子源；噴霧電壓-4000V；簾氣壓力40psi；離子源溫度700℃；輔助氣1為60psi；輔助氣2為50psi；去簇電壓-100V；化合物定量離子及能量見表1，

表1 類黃酮物質分析質譜定量離子及碰撞能量

以待測14個類黃酮化合物的含量為橫坐標，以其對應的色譜峰面積與內標化合物的色譜峰面積的比值為縱坐標，建立工作曲線，對校正數據進行線性回歸，求得類黃酮物質的回歸方程，試樣中類黃酮物質的含量按下式進行計算：

式中：c為煙草花瓣樣品中類黃酮物質的含量，單位μg/g；

x為儀器測得的供試品溶液的濃度。

2.根據權利要求1所述的定量分析煙草花瓣中14種類黃酮物質的檢測方法，其特征在于A步驟中所述的研磨是將待檢樣品煙草花瓣放入研缽，加液氮冷凍，研磨粉碎。