[發(fā)明專利]一種利用HRM法進(jìn)行牛/羊肉鑒別的標(biāo)記引物和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510309901.3
• 申請(qǐng)日: 2015-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN104962618B
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李春保;吳洽宇;周光宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;楊秀麗

本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域，提供一種利用HRM法進(jìn)行牛肉、羊肉鑒別的標(biāo)記引物以方法。牛肉鑒別的標(biāo)記，分別為：牛肉基因標(biāo)記1，序列如SEQ ID NO.1所示；牛肉基因標(biāo)記2，序列如SEQ ID NO.2所示；牛肉基因標(biāo)記3，序列如SEQ ID NO.3所示。羊肉鑒別標(biāo)記，分別為：羊肉基因標(biāo)記1，序列如SEQ ID NO.4所示；羊肉基因標(biāo)記2，序列如SEQ ID NO.5所示；羊肉基因標(biāo)記3，序列如SEQ ID NO.6所示。本發(fā)明通過HRM法鑒別牛、羊肉，具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，整個(gè)過程僅需2個(gè)小時(shí)完成。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域，涉及利用HRM法進(jìn)行牛肉、羊肉鑒別的標(biāo)記引物以方法。

背景技術(shù)

食品中肉類摻雜摻假已經(jīng)發(fā)展成我國(guó)食品質(zhì)量安全控制面臨的重要挑戰(zhàn)之一。在我國(guó)，由于羊肉、牛肉價(jià)格較高，而豬肉、雞肉等相對(duì)廉價(jià)，這使得很多不法商家為謀取暴利，使用相對(duì)廉價(jià)的肉類原料冒充牛/羊肉制品進(jìn)行銷售。目前，傳統(tǒng)的以經(jīng)驗(yàn)與感官為主的鑒別方法已遠(yuǎn)遠(yuǎn)無法滿足對(duì)食品中肉制品摻假現(xiàn)象進(jìn)行監(jiān)管與控制的需要，建立科學(xué)、準(zhǔn)確的羊肉、牛肉鑒別方法非常必要。

肉品的物種鑒別方法主要有蛋白質(zhì)水平的檢測(cè)方法和核酸水平的檢測(cè)方法，與蛋白質(zhì)水平的檢測(cè)相比，核酸檢測(cè)具有靈敏、特異、快速等優(yōu)點(diǎn)，已逐漸成為肉品成分鑒別的發(fā)展趨勢(shì)。

目前，在國(guó)內(nèi)外相關(guān)的研究中，對(duì)于肉品成分的鑒別，主要采用DNA探針雜交、RFLP-PCR法(限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性擴(kuò)增)、RAPD-PCR法(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性PCR)等方法。但DNA探針雜交法存在對(duì)交叉感染靈敏度差，靈敏度低的缺點(diǎn)，RFLP-PCR法操作復(fù)雜，且易受到目標(biāo)基因序列中酶切位點(diǎn)隨機(jī)突變的影響，產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性，RAPD-PCR法靈敏度低，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差，這成為了基于核酸水平進(jìn)行肉品物種鑒別的一個(gè)障礙。因此，若能找到一種簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，將有助于牛、羊肉鑒別技術(shù)的大規(guī)模推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服目前牛/羊肉檢測(cè)過程復(fù)雜、效率低下等問題，提供一種利用HRM法進(jìn)行牛/羊肉鑒別的標(biāo)記引物和方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)

1.本發(fā)明提供一種牛肉鑒別的標(biāo)記，，標(biāo)記為3個(gè)，分別為：

牛肉基因標(biāo)記1，序列如SEQ ID NO.1所示；

牛肉基因標(biāo)記2，序列如SEQ ID NO.2所示；

牛肉基因標(biāo)記3，序列如SEQ ID NO.3所示。

2.本發(fā)明還提供一種利用HRM法進(jìn)行牛肉鑒別的標(biāo)記引物，其中，根據(jù)牛肉基因標(biāo)記1，設(shè)計(jì)標(biāo)記引物對(duì)1；其中，

牛肉標(biāo)記引物1F：GTTTGACCTGCTCCTAACTCCATCCC，

牛肉標(biāo)記引物1R：GGAGGCAGTCGTCAGGCTATTCAA；

根據(jù)牛肉基因標(biāo)記2，設(shè)計(jì)標(biāo)記引物對(duì)2；其中，

牛肉標(biāo)記引物2F：GCAGTGAGATGACCCCGTGGA，

牛肉標(biāo)記引物2R：GCCATAAGGGAGGAACACTCTGAC；

根據(jù)牛肉基因標(biāo)記3，設(shè)計(jì)標(biāo)記引物對(duì)3；其中，

牛肉標(biāo)記引物3F：ACAGTGGGAACATTTCAAAGGAGGC，

牛肉標(biāo)記引物3R：GGTGTCAGAGGACCTGTCAGTGGAGT。

3.本發(fā)明還提供一種羊肉鑒別標(biāo)記，標(biāo)記為3個(gè)，分別為：

羊肉基因標(biāo)記1，序列如SEQ ID NO.4所示；

羊肉基因標(biāo)記2，序列如SEQ ID NO.5所示；