[發明專利]一種用于黃曲霉毒素B1富集分離的適配體-磁性納米粒子制備及應用

在審

• 申請號: 201510305417.3
• 申請日: 2015-06-05
• 公開（公告）號: CN104959114A
• 公開（公告）日: 2015-10-07
• 發明（設計）人: 廖且根;羅林廣
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院農產品質量安全與標準研究所
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;G01N1/34
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 趙敏

1.一種用于黃曲霉毒素B1分離的適配體-磁性納米粒子，包括如下結構：

(1)由順磁性的Fe₃O₄磁納米粒子構成內核層；

(2)包覆內核層的硅烷化層，被處理后的所述磁納米粒子具有反應活性的環氧官能團；

(3)具有環氧官能團的磁納米粒子經共價鍵作用與具有氨基修飾的黃曲霉毒素B1適配體連接，構成所述磁納米材料。

2.如權利要求1所述的磁納米材料，其特征在于，為形成所述硅烷化層選用的硅烷化試劑為3-(2,3-環氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷。

3.如權利要求1或2所述的磁納米材料，其特征在于，所述的磁納米材料具有外殼層表面，該外殼層表面為黃曲霉毒素B1適配體的修飾層。

4.如前述任一項權利要求所述的磁納米材料，其特征在于，所述黃曲霉毒素B1適配體的序列為：5’-NH₂-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’。

5.一種制備權利要求1-4任一項所述的黃曲霉毒素B1分離的適配體-磁性納米粒子復合物方法，包含以下步驟：

(1)通過水熱合成法獲得內核層的順磁性的Fe₃O₄鐵氧化合物；

(2)使用硅烷化試劑對步驟(1)中的鐵氧化合物進行包覆，形成表面具備環氧官能團的磁性納米粒子；

(3)用氨基修飾的黃曲霉毒素B1適配體與步驟(2)磁性納米粒子進行偶聯，用乙醇胺封閉多余的環氧官能團，形成黃曲霉毒素B1適配體-磁性納米粒子。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述硅烷化試劑為3-(2,3-環氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷。

7.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，它包括以下步驟：

(1)通過共沉淀技術、制備出Fe₃O₄磁納米粒子，在外加磁場下，洗滌納米粒子，冷凍干燥；

(2)使用3-(2,3-環氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷在甲苯體系中對步驟(1)的磁納米粒子表面進行修飾，得到修飾了環氧官能團的磁納米粒子，用乙醇和甲苯反復洗滌除去未反應的3-(2,3-環氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷；

(3)使用PBS緩沖溶液超聲分散所述步驟(2)得到的磁納米粒子，加入氨基修飾的黃曲霉毒素B1適配體，37℃孵育12小時，反應完成后，磁分離棄去上清液，所得磁性納米粒子溶于1mol/L?pH為8.0的乙醇胺中，封閉未反應的環氧官能團，40-60℃孵育4-6小時，反應完成后，磁分離棄去上清液，并用PBS緩沖溶液反復清洗，最終獲得黃曲霉毒素B1適配體-磁性納米粒子。

8.一種權利要求1-7任一項所述的復合物在黃曲霉毒素B1分離領域中的應用。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備獲得所述黃曲霉毒素B1適配體-磁性納米粒子復合物；

(2)被分離樣本用甲醇-水混合溶液或乙腈-水混合溶液進行提取，0.01～0.1mol/L?pH為7.4的PBS緩沖液稀釋至甲醇或乙腈在總溶液中的體積百分比少于10％，獲得稀釋液；

(3)將步驟(2)所述的稀釋液與步驟(1)所述的復合物進行反應，捕獲黃曲霉毒素B1，再經常外加磁塊進行磁性分離，棄去上清液；

(4)甲酸甲醇(1+99，v/v)或甲酸乙腈(1+99，v/v)作為洗脫液加入到步驟(3)得到的磁性納米粒子，室溫下振蕩，再經過外加磁場進行磁性分離，上清液為凈化后黃曲霉毒素B1樣本；

(5)將步驟(4)中所述的黃曲霉毒素B1適配體-磁納米粒子復合物進行再生，再生方法是用3-5mL的NaCl-乙酸緩沖溶液和3ml的NaCl-磷酸緩沖溶液交替清洗，其中，所述NaCl-乙酸緩沖溶液中NaCl為0.5mol/L、乙酸為0.1mol/L，溶液pH為4.0，所述NaCl-磷酸緩沖液中NaCl為0.5mol/L，溶液pH為8.3；每次清洗2min，至少循環3次，再生后，所述黃曲霉毒素B1適配體-磁納米粒子復合物重懸于0.1mol/L、pH為7.4的PBS緩沖液中保存在4℃冰箱中。