[發明專利]毛竹種胚誘導愈傷組織形成的方法

有效

• 申請號: 201510297831.4
• 申請日: 2015-06-02
• 公開（公告）號: CN104920213B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 項艷;趙康;李媛;陳丹梅;王依依
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥市上嘉專利代理事務所(普通合伙)34125
• 代理人: 王偉

1.毛竹種胚誘導愈傷組織形成的方法，包括以下步驟：

(1)種子的篩選

取毛竹種子，剝去外稃，采用TTC染色法對毛竹種子進行生活力測定，篩選出生活力高于75％的毛竹種子；

(2)種胚的消毒

取出篩選出的毛竹種子的種胚，切除50％以上的胚乳，用流水沖洗2—4小時，然后置于70—75％(v/v)乙醇中浸泡2—4分鐘，再用無菌水沖洗至表面光滑、背部溝槽中無明顯異物，然后于無菌條件下，置于1—2％(v/v)次氯酸鈉溶液中浸泡振蕩15—20分鐘，再用無菌水沖洗至表面光滑、背部溝槽中無明顯異物，最后于無菌條件下，置于每升加有3—5滴吐溫-80的0.05—0.1％(w/v)升汞中浸泡振蕩30—40分鐘，再去除表面水分備用；

(3)愈傷組織的誘導與增殖

將消毒后的種胚接種到誘導培養基上，暗培養7—10天使愈傷組織形成，然后將愈傷組織分離出來，接種到增殖培養基上增殖培養20—30天即可。

2.如權利要求1所述的毛竹種胚誘導愈傷組織形成的方法，其特征在于：所述誘導培養基是以N6/B5/MS復合培養基為基礎，添加3—5mg/L的2，4-D、0.1—0.3mg/L的ZT，500mg/L的脯氨酸、500mg/L的谷氨酰胺和300mg/L的水解酪蛋白，所述N6/B5/MS復合培養基包括1900mg/L的硝酸鉀、1650mg/L的硝酸銨、170mg/L的磷酸二氫鉀、370mg/L的七水合硫酸鎂、440mg/L的二水合氯化鈣、0.75mg/L的碘化鉀、3.0mg/L的硼酸、10.0mg/L的一水合硫酸錳、2.0mg/L的七水合硫酸鋅、0.25mg/L的二水合鉬酸鈉、0.025mg/L的六水合氯化鈷、0.025mg/L的五水合硫酸銅、37.25mg/L的乙二胺四乙酸二鈉、27.85mg/L的七水合硫酸亞鐵、0.1mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的鹽酸吡哆醇、0.5mg/L的煙酸、2.0mg/L的甘氨酸、28g/L的蔗糖和8g/L的瓊脂；

所述增殖培養基是以MS培養基為基礎，添加3—5mg/L的2，4-D、500mg/L的脯氨酸、500mg/L的谷氨酰胺和300mg/L的水解酪蛋白。