[發明專利]一種以腙鍵連接的納米鉆石藥物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201510291034.5
• 申請日: 2015-05-29
• 公開（公告）號: CN104922690A
• 公開（公告）日: 2015-09-23
• 發明（設計）人: 李林;李英奇;楊斌盛
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

技術領域

本發明涉及納米鉆石藥物，特別涉及pH調控釋藥的納米藥物，具體屬于一種以腙鍵共價連接阿霉素的納米鉆石藥物及其制備方法，以及該藥物在制備抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

隨著科技與經濟的發展，環境惡化、食品安全和社會壓力等問題促使了惡性腫瘤的高增長率。然而在腫瘤的治療中存在著諸多問題，主要歸結為傳統的化學療法使用的小分子藥物存在著嚴重的毒副作用，其在殺死腫瘤細胞的同時也殺死正常組織及細胞，且頻繁用藥會致使腫瘤細胞產生多藥耐藥性，導致療效降低。因此，研發一種低毒高效的新型藥物顯得尤為迫切。

隨著現代納米技術的興起，納米技術對醫學的發展產生了巨大的影響，使納米藥物產生獨特優勢，為攻克癌癥開創了新的診斷和治療思路，為新型化療藥物的合成提供了新的契機。納米藥物輸送系統因其具有對藥物可控釋放、可改變藥物的體內分布、提高藥物血液循環時的穩定性、改善藥物吸收及部分逆轉腫瘤的多藥耐藥性等優點，目前已經發展為用于腫瘤治療的研究熱點之一。納米鉆石因其具有低毒性、高生物相容性和表面易修飾特性，將其作為載體制備納米藥物時受到了眾多研究者的青睞。腙鍵因其具有在正常生理組織(pH?7.4)及弱堿性的血液循環中,保持良好的穩定性，而腫瘤組織周圍環境呈弱酸性，細胞內內涵體或溶酶體中也呈pH?4-5.5的弱酸性，在這些弱酸性環境中，由腙鍵偶聯的化療藥物可以很快發生斷裂，使藥物釋放，從而明顯降低藥物的毒副作用。基于納米鉆石具有低毒性及高生物相容性，其作為藥物輸送載體對人體幾乎不會產生生理毒性，而腙鍵因其具有良好的pH敏感性，因此我們將納米鉆石作為載體，以化療藥物阿霉素為藥物模型，將阿霉素以腙鍵連接于其表面，制備得到了納米鉆石藥物，并研究了該藥物對腫瘤細胞活性、周期、凋亡等的影響。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以腙鍵連接的納米鉆石藥物及其制備方法，以及該藥物在抗腫瘤藥物中的應用。

本發明提供的一種以腙鍵連接的納米鉆石藥物的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱取真空干燥的羧基化納米鉆石，按每毫克羧基化納米鉆石加入1-1.5mL的濃度為0.1M，pH為5.8的MES緩沖溶液中，超聲分散30min形成懸濁液，再按每毫克羧基化納米鉆石加入0.2mg?EDC、0.25mg?NHS，室溫攪拌反應6h，反應完畢后以15000rpm高速離心5min?棄除上清液，從而得到活化羧基的納米鉆石沉淀物；接著將活化羧基的納米鉆石沉淀物迅速分散到濃度為0.1M，pH為8.4的硼酸緩沖溶液中，經過短暫超聲分散形成懸濁液，再按每毫克活化的羧基化納米鉆石快速加入0.3mg聚乙二醇(H₂N-PEG-COOH)，繼續室溫攪拌反應12h，待反應結束，以15000rpm高速離心5min吸除上清液，并用0.1M，pH?8.4的硼酸緩沖溶液高速離心洗滌三次，獲得納米鉆石-聚乙二醇(ND-PEG-COOH)沉淀物；

(2)稱取干燥的納米鉆石-聚乙二醇(ND-PEG-COOH)，按每毫克納米鉆石-聚乙二醇(ND-PEG-COOH)加入1-1.5mL的濃度為0.1M，pH為5.8的MES緩沖溶液中，超聲分散30min形成懸濁液，再按每毫克羧基化納米鉆石-聚乙二醇加入0.2mg?EDC、0.25mg?NHS，室溫攪拌反應6h，反應完畢后以15000rpm高速離心5min棄除上清液，從而得到活化羧基的納米鉆石-聚乙二醇沉淀物；接著將活化羧基的納米鉆石-聚乙二醇沉淀物迅速分散到濃度為0.1M，pH為8.4的硼酸緩沖溶液中，經過短暫超聲分散形成懸濁液，再按每毫克活化的羧基化納米鉆石-聚乙二醇快速滴加0.01mL水合肼(H₂NN₂H·H₂O)，繼續室溫攪拌反應12h，待反應結束，以15000rpm高速離心5min吸除上清液，并用0.1M，pH?8.4的硼酸緩沖溶液高速離心洗滌三次，再用無水甲醇高速離心洗滌三次，得到納米鉆石-聚乙二醇-水合肼(ND-PEG-HYD)沉淀物；并置于真空干燥箱中干燥；