[發明專利]一種利用UPLC?Q?TOF/MS技術快速測定寡聚古羅糖醛酸的方法

有效

• 申請號: 201510280987.1
• 申請日: 2015-05-28
• 公開（公告）號: CN104897835B
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 張爽;陶冠軍;秦昉;陳潔
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/60;G01N30/72;G01N30/34
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)32104
• 代理人: 時旭丹,劉品超

技術領域

本發明涉及寡聚古羅糖醛酸（G1-G4）的檢測方法，尤其涉及一種超高效液相色譜-四級桿串聯飛行時間質譜（UPLC Q TOF/MS）聯用技術的寡聚古羅糖醛酸快速定性定量方法，屬于檢測技術領域。

背景技術

本發明涉及的寡聚古羅糖醛酸的檢測方法可用于相關藥品、保健品等的質量控制中。寡聚古羅糖醛酸是褐藻膠水解產物，研究證明低聚褐藻酸鈉具有降血壓、降血脂、抗氧化、抗炎癥等功效，已被用于心血管的疾病的治療中。目前關于寡聚古羅糖醛酸的檢測方法鮮有報道。目前可見文獻中，對寡聚古羅糖醛酸的表征需要凝膠滲透色譜和高效液相色譜分離純化，再試用質譜、核磁共振等手段進行表征。這一手段耗時長，步驟復雜，無法滿足快速分析檢測的要求。

本發明方法采用超高效液相色譜四級桿串聯飛行時間質譜檢測，使用CSH（表面帶電雜化顆粒）的C18色譜柱，分別以乙腈、0.1%甲酸為流動相A和B，進行梯度洗脫，使古羅糖醛酸單糖到四糖在5分鐘內實現分離，采用電噴霧離子源，負離子模式在50到2000 Da進行掃描，對每一種糖醛酸對應的特征離子進行提取并獲得積分峰面積，從而實現對寡聚古羅糖醛酸的快速分析鑒定。

發明內容

本發明提供了一種快速、準確的寡聚古羅糖醛酸的檢測方法。

本發明的技術方案，一種利用UPLC-Q-TOF/MS技術快速測定寡聚古羅糖醛酸的方法，步驟為：

（1）標準品的準備：準備古羅糖醛酸單糖G1、古羅糖醛酸二糖G2、古羅糖醛酸三糖G3、古羅糖醛酸四糖G4；

（2）樣品前處理：將含寡聚古羅糖醛酸樣品以超純水溶解，配成濃度為0.1g/mL溶液，過0.22μm濾膜后待測；

（3）色譜條件：色譜柱 ACQUITY UPLC CSH C18 Column，2.1 mm×100 mm，1.7μm，流動相為乙腈A相和0.1%甲酸B相，流動梯度洗脫程序：0-1 min，2% A+98 %B；1-15min，2 %A+98%B～60%A+40%B；15-17 min，60%A+40%B～100 %A，流速0.3mL/min，柱溫：45℃，進樣量 1μL；

（4）質譜條件：質譜儀WATERS MALDI SYNAPT-Q-TOF/MS ，電噴霧離子源，負離子掃描模式。離子源溫度100℃，脫溶劑溫度400℃，脫溶劑氣流量700L/h，錐孔氣流量50 L/h，掃描范圍50-2000Da，一級質譜錐孔電壓30 V，裂解能量6eV，掃描時間1s；

（5）寡聚古羅糖醛酸定性定量方法的建立：具有標準樣品下，采用外標法定量；將4種標準品G1-G4配成等質量濃度的混合標準儲備液，并用乙腈-水溶液逐級稀釋使4種寡聚古羅糖醛酸含量均分別為15、30、50、75、100、125、150mg/L，以每個濃度下每個寡聚古羅糖醛酸對應的母離子提取離子色譜圖中的積分峰面積為縱坐標，混合標準溶液的濃度為橫坐標，建立標準曲線；

G1-G4分別對應的母離子依次為：G1選擇m/z 193、G2選擇m/z 369、G3選擇m/z 545、G4選擇m/z 721；檢測樣品時，根據樣品在同一保留時間處對應的提取離子積分峰面積值，根據標準曲線方程，獲得對應寡聚古羅糖醛酸的含量。

線性方程如表1所示。

表1 線性方程

本發明的有益效果：本發明快速、準確的檢測了寡聚古羅糖醛酸，并給出寡聚古羅糖醛酸在質譜中的母離子及碎片離子的特征，從而不僅可以實現對樣品中古羅糖醛酸單糖到四糖的準確定性定量，同時可根據質譜信息對樣品中可能含有的未知寡聚古羅糖醛酸進行推測、解析。

附圖說明

圖1是寡聚古羅糖醛酸（G1- G 4）的提取離子色譜圖。

具體實施方式

實施例1 褐藻多糖水解物中寡聚古羅糖醛酸的檢測

1、標樣：古羅糖醛酸單糖（G1）、古羅糖醛酸二糖（G2）、古羅糖醛酸三糖（G3）、古羅糖醛酸四糖（G4）。

2、樣品前處理：取 0.1g褐藻多糖水解物加入1mL超純水，渦旋混勻溶解，室溫過0.22 μm濾膜，待測。