[發明專利]三磷酸腺苷二鈉的制備方法

在審

• 申請號: 201510280355.5
• 申請日: 2015-05-28
• 公開（公告）號: CN104894192A
• 公開（公告）日: 2015-09-09
• 發明（設計）人: 阮傳明;盧志榮;黃偉
• 申請（專利權）人: 廣西浦北制藥廠
• 主分類號: C12P19/32
• 分類號: C12P19/32;C07H19/20;C07H1/06
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司 45107
• 代理人: 湯凌志

1.三磷酸腺苷二鈉的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)生化反應

(1)氯化鎂溶液、腺苷溶液、苯扎溴銨溶液的制備：

①用少量反滲透水溶解氯化鎂制成氯化鎂溶液；

②用適量加熱至85℃以上的反滲透水溶解腺苷制成腺苷溶液；

③用適量的反滲透水溶解苯扎溴銨稀釋成5％苯扎溴銨溶液；

(2)投放速凍酵母：加反滲透水于反應鍋中，開動攪拌用夾套熱水加熱至40-45℃，投放蔗糖及磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀，使其溶解，待其全部溶解后，停止加熱，開循環水降溫，當溫度降至40℃以下時，投放速凍酵母，并用夾套熱水緩慢升溫；

所述的速凍酵母，是指將啤酒酵母泥用適量反滲透水清洗，然后再用板框過濾器過濾，得到白色或淡褐色泥狀物，再通過速凍得到；

(3)ATP生化反應：當反應鍋內溫度升至20℃±1時，依次投放氯化鎂溶液、苯扎溴銨溶液、腺苷溶液，反應開始計時，將反應液繼續加熱至36-39℃，保溫，待有氣泡溢出，開始取樣測定ATP轉化率，當反應達到ATP－條帶時，反應結束；

(4)滅活、調酸堿：反應結束，立即放掉夾套熱水，迅速投放大量冰于反應鍋內，并通冷卻水降溫，當溫度降至4℃以下，用磷酸調pH至2.5-3.0，1小時后，再用液堿調pH至5.5-6.0，調好堿后30分鐘開始壓榨，壓榨完畢，再用反滲透水頂洗濾餅，水頂液合并壓榨液，檢驗含量、透光度，合格送分離工段處理；

2)樹脂分離

(1)串柱上樣：將壓榨液及水頂液稀釋至0.2-0.45％，上D296樹脂柱，流速為4-6L/min，定時檢測流出液，查看是否有ATP漏出；當流出液中ATP濃度≥0.03％時，停止上樣，用反滲透水正頂至流出液ATP濃度≤0.01％后，繼續上樣，如此反復直至上樣結束；

(2)水洗雜質：串柱上樣結束，用反滲透水正進洗滌至流出液A_257nm≤0.2；然后反進水洗至樹脂上層無渾濁機械雜質且流出液A_257nm≤0.2后結束；流速控制在4-6L/min；

(3)稀鹽洗雜質：水洗結束，用pH?2.0-2.2的0.04mol/LNaCl--0.01mol/L?HCl稀鹽液反進流洗，流速為6-10L/min；每小時取樣，測流出液中ATP濃度，當流出液中ATP濃度≥0.03％時，反進洗雜質結束；改正進，正進流速不變，每小時取樣一次，測流出液中ATP的濃度，當流出液中ATP濃度≥0.025％時，每半小時取樣一次監測；當流出液pH跳至2-4，且ADP基本洗盡或只有ATP時，洗滌結束，開始洗脫；

(4)洗脫：用pH?3.5-3.8的1mol/LnaCl-0.01mol/L?HCl濃鹽液進行洗脫，當洗脫流出液ATP濃度>0.38％時，收集洗脫液，送脫色；當洗脫流出液ATP濃度<0.38％時，即停止收集；

3)精制

(1)脫色：洗脫液根據色澤加入0.1-0.5％活性炭和0.1-0.3％硅藻土攪拌1小時脫色，離心分離過濾后，脫色液經檢驗合格后送超濾除蛋白；

(2)超濾：將脫色液用<1萬分子量的超濾膜進行超濾除蛋白，合格后送去結晶；

(3)結晶：超濾液先用CP級HCl調pH至2.5-3.3，再用＞1萬分子量的超濾膜進行超濾除蛋白，合格后放入結晶釜，開動攪拌，開始加入95％(v/v)乙醇，出現白色混濁前酒精加入速度控制在100L/h；出現白色混濁時，停止加酒精，攪拌半小時，然后繼續加酒精至料液體積的1.5-2.0倍，保持溫度攪拌半小時，然后開夾套冷卻水，將料液冷至室溫，靜止1小時；

離心分離結晶液，濕品先用95％(v/v)酒精洗滌，再用無水乙醇浸泡，最后甩干送去干燥；母液調pH至6.0-7.0后送蒸餾工段進行回收酒精；

4)干燥包裝

(1)干燥：將濕品放入干燥箱中，真空度≤－0.085Mpa，控制溫度在34-40℃，加P₂O₅吸濕，烘干過程定時翻料，并檢測水分，當水分≤8％時可出料；

(2)包裝：將合格的產品按規定的批量放入混合器中混合15-20分鐘，然后按進行包裝送檢，合格入庫。